产品货号：
SK350
中文名称：
ATP含量检测试剂盒(可见分光光度法)
英文名称：
产品规格：
50管/48样
发货周期：
1～3天
产品价格：
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ATP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。
肌酸激酶催化肌酸和ATP反应生成磷酸肌酸，可在700nm下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量，以此反应ATP含量。
| 组分 | 规格 |
| 试剂一粉剂 | 1瓶 |
| 试剂二 | 3mL |
| 试剂三粉剂 | 1瓶 |
| 试剂四 | 10mL |
| 试剂五 | 50mL |
| 0.5μmol/mL ATP标准液 | 10mL |
保存：2～8℃，其中试剂三需置于-20℃，有效期1年。
分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵和蒸馏水。
- 试剂一：临用前向试剂三粉剂中加入3.5mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
- 试剂三：临用前向试剂三粉剂中加入600μL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
正式测定前务必取2～3个预期差异较大的样本做预测定。
- ATP提取：
- 组织中ATP的提取：称取约0.1g样本，加入1mL蒸馏水，冰浴匀浆，100℃加热提取5min，8000g 4℃离心15min，取上清液待测。
- 细胞或细菌中ATP的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量(104个)∶蒸馏水(mL)为500～1000∶1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL蒸馏水），超声波破碎1min（冰浴，强度20％或200W，超声2s，停1s），8000g 4℃离心15min；取上清液待测。
- 血清（浆）中ATP的提取：取约0.1mL血清（浆），加入1mL蒸馏水，冰浴匀浆，100℃加热提取5min，8000g 4℃离心15min，取上清液待测。
- 组织中ATP的提取：称取约0.1g样本，加入1mL蒸馏水，冰浴匀浆，100℃加热提取5min，8000g 4℃离心15min，取上清液待测。
- 测定步骤：
- 分光光度计预热30min以上，调节波长到700nm，蒸馏水调零。
- 显色剂的配制：临用前请根据拟用显色剂体积（样本数×0.87mL），按试剂四∶试剂五=1∶5的比例配制。用多少配多少。
- 样本测定：
成分(μL) 测定管 标准管 空白管 样本 30 标准液 30 30 试剂一 60 60 试剂二 30 30 30 试剂三 10 10 蒸馏水 70 充分混匀，37℃准确水浴30min。 显色剂 870 870 870 37℃水浴20min后，700nm下测定各管吸光值。 - 空白管和标准管通常只需要各做一个。
- 分光光度计预热30min以上，调节波长到700nm，蒸馏水调零。
- 血清（浆）中ATP含量计算
ATP含量
(μmol/mL)= C标准× A测定－A空白 ×V1÷(V3×V1÷V2) A标准－A空白 = 5× A测定－A空白 A标准－A空白 - 组织、细菌或细胞中ATP含量计算
- 按蛋白浓度计算
ATP含量
(μmol/mg prot)= C标准× A测定－A空白 ×V1÷(V1÷Cpr) A标准－A空白 = 0.5× A测定－A空白 ÷Cpr A标准－A空白 - 蛋白质含量需要另外测定。
- 按样本鲜重计算
ATP含量
（μmol/g鲜重)= C标准× A测定－A空白 ×V1÷(W×V1÷V2) A标准－A空白 = 0.5× A测定－A空白 ÷W A标准－A空白 - 按细菌或细胞密度计算
ATP含量
(μmol/104 cell)= C标准× A测定－A空白 V1÷(500×V1÷V2) A标准－A空白 = 0.001× A测定－A空白 A标准－A空白
- 按蛋白浓度计算
C标准：标准液浓度，0.5μmol/mL；
V1：加入反应体系中样本体积，0.03mL；
V2：加入提取液体积，1mL；
V3：加入血清（浆）体积：0.1mL；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g；
500：细胞或细菌总数，500万。
注意：最低检测限为10nmol/mL或10nmol/g鲜重或0.1nmol/mg prot
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