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β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解，此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖。


β-GAL分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。

组分	规格
提取液	50mL
试剂一(粉剂)	1瓶
试剂二	15mL
试剂三	50mL

保存：


试剂一粉剂临用前每瓶加入5mL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存。


可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

• 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量(10⁴个)∶提取液体积（mL）为500～1000∶1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；
  15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
  
• 组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1∶5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
  
• 培养液等液体样本：直接检测。

• 分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
  
• 样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）：
  

  试剂名称（μL）	测定管	对照管
  试剂一溶液	200
  蒸馏水		200
  试剂二	250	250
  样本	50	50

• 迅速混匀，放入37℃准确水浴30min。
  
• 各管中加入1mL试剂三。
  
• 充分混匀，400nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。

β-GAL活性计算：
标准条件下测定的回归方程为y =0.00543x -0.0027；x为标准品浓度（nmol/mL），y为吸光值。

• 按样本蛋白浓度计算：
  单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
  β-GAL活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V_反总]÷(V_样×Cpr)÷T=61.39×(ΔA+0.0027)÷Cpr
  需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
  
• 按样本鲜重计算：
  单位的定义：每g组织每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
  β-GAL活力(nmol/min/g鲜重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V_反总]÷(W×V_样÷V_样总)÷T=61.39×(ΔA+0.0027)÷W
  
• 按细菌或细胞密度计算：
  单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
  β-GAL活力(nmol/min/10⁴ cell)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V_反总]÷(500×V_样÷V_样总)÷T=0.123×(ΔA +0.0027)
  
• 按液体体积计算：
  单位的定义：每mL液体样本每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
  β-GAL活力(nmol/min/mL)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V_反总]÷V_样÷T=61.39×(ΔA+0.0027)

V_反总：反应体系总体积，0.5mL；
V_样：加入反应体系中样本体积，0.05mL；
V_样总：加入提取液体积，1mL；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g；
500：细胞或细菌总数，500万；
T：反应时间，30min。
相关搜索：β-半乳糖苷酶(β-GAL)测试盒(可见分光光度法)，β-半乳糖苷酶检测，β-GAL检测