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葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物，而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言，葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的唯一能源，而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在540nm有特征吸收峰。

• 本试剂盒仅可用于科研实验，严禁用于医疗检测！
  
• 正式测定前务必取2～3个预期差异较大的样本做预测定。

• 组织的处理：按照组织质量(g)∶蒸馏水体积(mL)为1∶5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水），研磨成匀浆，95℃水浴10分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心10min，取上清液备用。
  
• 细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量(10⁴个)∶蒸馏水体积(mL)为500～1000∶1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL蒸馏水），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3S，间隔10S，重复30次），95℃水浴10分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心10min，取上清液备用。

• 分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
  
• 混合试剂的配制：使用前将试剂二溶液和试剂三按1∶1等体积混合，用多少配多少。
  
• 加样表（在EP管中加入下列试剂）
  

  成分(μL)	空白管	标准管	测定管
  样本			100
  试剂一		100
  蒸馏水	100
  混合试剂	900	900	900

• 混匀，置37℃保温15min后，于540nm波长处读取吸光度。空白管、标准管和测定管吸光值分别记为A₁、A₂和A₃。空白管和标准管只要做一管。

• 按样本蛋白浓度计算
  葡萄糖含量(μmol/mgprot)=(C_标准×V₁)×(A₃-A₁)÷(A₂-A₁)÷(V₁×Cpr)=0.5×(A₃-A₁)÷(A₂-A₁)÷Cpr。
  
• 按样本鲜重计算
  葡萄糖含量（μmol/g鲜重）=(C_标准×V₁)×(A₃-A₁)÷(A₂-A₁)÷(W×V₁÷V₂)=0.5×(A₃-A₁)÷(A₂-A₁)÷W
  
• 按细菌或细胞密度计算
  葡萄糖含量（μmol/10⁴cell)= (C_标准×V₁)×(A₃-A₁)÷(A₂-A₁)÷(500×V₁÷V₂)=0.001×(A₃-A₁)÷(A₂-A₁)

• 最低检测限为50nmol/g鲜重或0.5nmol/mgprot。
  
• A₃大于4时，说明样本葡萄糖浓度过高，需要用蒸馏水适当稀释后测定，并且在计算结果中乘以相应稀释倍数。