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GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。

3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD，340nm处测定NADH的减少量可反映GADPH活性的高低。

• 组织样本的前处理
  
  • 总GAPDH酶提取：
    
    • 建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液一；
      
    • 冰浴匀浆后超声破碎(冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min)；
      
    • 4℃，8000g离心10min，取上清测定。
  • 胞浆和叶绿体GAPDH酶的分离：
    
    • 按照植物组织质量(g)∶提取液体积(mL)为1∶5～10的比例；
      
      • 建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液一。
    • 冰浴匀浆后于4℃，200g离心5min，弃沉淀，取上清在4℃；
      
    • 8000g离心10min，取上清用于测定胞浆GAPDH酶活性；
      
    • 取沉淀加1mL提取液二，震荡溶解后超声破碎(冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min)；
      
    • 4℃，8000g离心10min，取上清测定叶绿体中GAPDH酶活性。
  • 建议测定总GAPDH酶活性，按照步骤1提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的GAPDH，则按照步骤2提取粗酶液。
• 细菌或培养细胞的前处理
  
  • 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；
    
  • 按照细菌或细胞数量(10⁴个)∶提取液一体积(mL)为500～1000∶1的比例；
    
    • 建议500万细菌或细胞加入1mL提取液一。
  • 超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次)；
    
  • 8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

• 分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
  
• 样本测定
  
  • 工作液的配制：将试剂二全部倒入试剂一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟。
    
    • 用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
  • 在试剂三中加入1mL蒸馏水，充分混匀待用；
    
    • 用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
  • 在1mL石英比色皿中加入30μL样本、20μL试剂三和950μL工作液，混匀，加入最后一个试剂的同时开始计时，记录340nm处20s时的吸光值A₁和5min20s后的吸光值A₂，计算ΔA＝A₁－A₂。

• 按样本蛋白浓度计算
  单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
  GAPDH(nmol/min/mgprot)＝[ΔA×V_反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V_样×Cpr)÷T=1072×ΔA÷Cpr
  
• 按样本鲜重计算
  单位的定义：每g组织每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
  GAPDH(nmol/min/g鲜重)＝[ΔA×V_反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W×V_样÷V_样总)÷T=1072×ΔA÷W
  
• 按细菌或细胞密度计算
  单位的定义：每一万个细菌或细胞每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
  GAPDH(nmol/min/10⁴cell)＝[ΔA×V_反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V_样÷V_样总)÷T=2.144×ΔA