产品货号：
SK095-2
中文名称：
线粒体呼吸链复合体Ⅳ/细胞色素C氧化酶测试盒(可见分光光度法)
英文名称：
产品规格：
25管/24样
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C氧化酶，也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责催化还原型细胞色素C的氧化，并最终把电子传递给氧，生成水。
还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C生成氧化型细胞色素C，因此550nm光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。
| 组分 | 规格 |
| 试剂一 | 25mL |
| 试剂二 | 5mL |
| 试剂三 | 0.5mL |
| 试剂四 | 10mL×2 |
| 试剂五粉剂 | 2支 |
| 试剂六粉剂 | 2支 |
保存：-20℃，其中试剂四置于4℃保存，有效期3个月。
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
- 准确称取0.1g组织或收集500万细菌或细胞，加入1mL试剂一和10μL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
- 将匀浆600g，4℃离心5min。
- 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
- 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅳ（此步可选做）。
- 步骤4中的沉淀即为线粒体，加入200μL试剂二和2μL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于复合体Ⅳ酶活性测定。
- 分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
- 样本测定
- 工作液的配制：临用前取试剂四、试剂五、试剂六各一支，将试剂五和试剂六依次转移到试剂四中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
- 将工作液置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；
- 在1mL玻璃比色皿中加入80μL样本和800μL工作液，混匀，记录550nm处初始吸光值A1和37℃反应30min后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
- 若ΔA大于0.2，需将样本用试剂二稀释适当倍数（计算公式中乘以相应稀释倍数），使A1-A2小于0.2，可提高检测灵敏度。
- 工作液的配制：临用前取试剂四、试剂五、试剂六各一支，将试剂五和试剂六依次转移到试剂四中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
复合体Ⅳ活力单位的计算：
- 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。复合体Ⅳ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr)÷T=19.20×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。 - 按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。复合体Ⅳ活力(nmol/min/g鲜重)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W×V样÷V样总)÷T=3.88×ΔA÷W - 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。复合体Ⅳ活力(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.008×ΔA
V反总：反应体系总体积，8.8×10-4 L；
ε：细胞色素C摩尔消光系数，1.91×104 L/mol/cm；
d：比色皿光径，1cm；
V样：加入样本体积，0.08mL；
V样总：加入提取液体积，0.202mL；
T：反应时间，30min；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g；
500：细胞或细菌总数，500万。
相关搜索：线粒体呼吸链复合体Ⅳ/细胞色素C氧化酶测试盒(可见分光光度法)，线粒体呼吸链复合体Ⅳ检测，细胞色素C氧化酶检测