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脯氨酸(PRO)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内Pro含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。

用磺基水杨酸（SA）提取Pro，加热处理后，Pro与酸性茚三酮溶液反应生成红色；加甲苯（或二甲苯）萃取后，在520nm测定吸光度。

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、冰乙酸25mL、甲苯50mL、研钵、冰和蒸馏水。

• 细菌或培养细胞样品：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞(10⁴个)∶提取液(mL)＝500～1000∶1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；之后置95℃水浴振荡提取10min；10000g，25℃离心10min，取上清，冷却后待测。
  
• 组织样品：按照组织(g)∶提取液(mL)＝1∶5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），匀浆；之后置95℃水浴振荡提取10min；10000g，25℃离心10min，取上清，冷却后待测。
  
• 血清（浆）样品：按照血清/浆(mL)∶提取液(mL)＝1∶5～10的比例（建议取0.1mL血清（浆）加入1mL提取液），充分混匀，之后置95℃水浴振荡提取10分钟，10000g，25℃离心10分钟，取上清，冷却后待测。

• 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。
  
• 样本测定：
  
  • 取0.25mL样本+0.25mL试剂一+0.25mL试剂二于有盖EP管中，置95℃水浴中保温30min（盖紧，防止水分散失），每10min振荡一次。
    
  • 待冷却后，加入0.5mL试剂三，振荡30s，静置片刻，使色素转至试剂三中；吸取0.2mL上层溶液于微量石英比色皿或96孔板中，于520nm波长处比色，记录吸光值A。

• 用微量石英比色皿测定的计算公式
  
  • 典型回归方程y = 0.0521x - 0.0021 (x为脯氨酸含量，μg/mL；y为吸光值A)
    
  • 按照血清（浆）体积计算
    
    Pro含量(μg/mL)=[(A+0.0021)÷0.0521×V₁]÷(V₃×V₁÷V₂）=192×(A+0.0021)
    
    
  • 按照蛋白浓度计算
    
    Pro含量(μg/mg prot)=[(A+0.0021)÷0.0521×V₁]÷(V₁×Cpr)=19.2×(A+0.0021)÷Cpr
    
    
  • 按照样本质量计算
    
    Pro含量(μg/g鲜重)= [(A+0.0021)÷0.0521×V₁]÷(W×V₁÷V₂)=19.2×(A+0.0021)÷W
    
    
  • 按照细菌或细胞密度计算
    
    Pro含量(μg/10⁴ cell)=[(A+0.0021)÷0.0521×V₁]÷(500×V₁÷V₂)=0.0384×(A+0.0021)
• 用96孔板测定的计算公式
  
  • 典型回归方程y = 0.02605x - 0.0021 (x为脯氨酸含量，μg/mL；y为吸光值A)
    
  • 按照血清（浆）体积计算
    
    Pro含量(μg/mL)=[(A+0.0021)÷0.02605×V₁]÷(V₃×V₁÷V₂）=384×(A+0.0021)
    
    
  • 按照蛋白浓度计算
    
    Pro含量(μg/mg prot)=[(A+0.0021)÷0.02605×V₁]÷(V₁×Cpr)=38.4×(A+0.0021)÷Cpr
    
    
  • 按照样本质量计算
    
    Pro含量(μg/g鲜重)= [(A+0.0021)÷0.02605×V₁]÷(W×V₁÷V₂)=38.4×(A+0.0021)÷W
    
    
  • 按照细菌或细胞密度计算
    
    Pro含量(μg/10⁴ cell)=[(A+0.0021)÷0.02605×V₁]÷(500×V₁÷V₂)=0.0769×(A+0.0021)

• V₁：加入反应体系中样本体积，0.25mL；
  
• V₂：加入提取液体积，1mL；
  
• V₃：加入血清（浆）体积，0.1mL；
  
• Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
  
• W：样本质量，g；
  
• 500：细菌或细胞总数，500万。
  
• 最低检测限为1μg/mL或1μg/g鲜重或0.01μg/mg pro。