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羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。

H₂O₂/Fe²⁺通过Fenton反应产生羟自由基，水杨酸能有效捕捉产生的羟自由基并与其反应生成有色物质2,3-二羟基苯甲酸，在510nm处有最大吸收峰，加入具有清除能力的物质后，有色物质便会减少，从而可以根据吸光值的数值判断样品清除羟自由基的能力。

为了比较不同样品羟自由基清除能力，对于同一批样品必须加入等量的样品，血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。

• 组织：按照组织质量(g)∶蒸馏水体积(mL)为1∶5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
  
• 血清、果汁等液体样品可直接测定。
  
• 提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如5mg/mL。

• 分光光度计预热30min，调节波长至510nm，蒸馏水调零。
  
• 在EP管中加入如下试剂：
  

  成分(μL)	对照管	空白管	测定管
  试剂一	150	150	150
  试剂二	150		150
  H2O	750	900	450
  试剂三	300	300	300
  样本			300

  
  
• 混匀，37℃保温20min，吸取1mL于玻璃比色皿测定510nm处吸光值，对照管、空白管和测定管的吸光值分别记为A对、A空和A测。
  
  • 空白管和对照管只需测定一次。