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SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成H₂O₂和O₂。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H₂O₂主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。

通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O₂^-·)，O₂^-·可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在560nm处有吸收；SOD可清除O₂^-·，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。

• 正式测定前务必取2～3个预期差异较大的样本做预测定
  
• 试剂二为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。
  
• 对照管只需要做一管。
  
• 若对照管吸光值大于2，建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用（10μL试剂二原液+60μL蒸馏水）。
  
• SOD为什么有的样本测定管大于对照管，对照管数值在什么范围？
  
  • 对照管的范围是0.8～2。
    
  • 对照管吸光值过低可能是
    ① 试剂二或试剂四没有现配现用；
    ② 没有按顺序加试剂；
    ③ 反应时间不够，可以延长反应时间（反应时间30min可以延长到40min）。
    
  • 对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
    
  • 若出现测定管大于对照管，可能是样本中杂质的影响太大，为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测，通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。

• 细菌、细胞或组织样品的制备：
  
  • 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）∶提取液体积（mL）为500~1000∶1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
    
  • 组织：按照组织质量(g)∶提取液体积(mL)为1∶5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
• 血清（浆）样品：直接检测。

• 分光光度计预热30min以上，调节波长至560nm，蒸馏水调零。
  
• 将试剂二用蒸馏水稀释两倍，用多少配多少。（试剂二和蒸馏水1∶1稀释）
  
• 将一瓶试剂四用5mL蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)，再用蒸馏水稀释4倍，用多少配多少(试剂四和蒸馏水1∶3稀释)。
  
• 测定前将试剂一、三和四在37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴5min以上。
  
• 样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）：
  

  成分(μL)	测定管	对照管
  试剂一	240	240
  试剂二	6	6
  样本	90
  蒸馏水		90
  试剂三	180	180
  试剂四	510	510

  
  
• 充分混匀，室温静置30min后，加入1mL玻璃比色皿，560nm处测定各管吸光值A。

• 抑制百分率的计算
  抑制百分率＝(A _对照管－A _测定管)÷A _对照管×100%尽量使样本的抑制百分率在10～90%范围内。如果计算出来的抑制百分率小于10%或大于90%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需将样本用提取液适当稀释；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本。
  
• SOD酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为50%时，反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位(U/mL)。
  
• SOD酶活性计算：
  
  • 血清(浆)：SOD活性(U/mL)＝[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V_反总]÷V_样＝11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)
    
  • 组织、细菌或培养细胞SOD活力计算：
    
    • 按样本蛋白浓度计算
      

      SOD活性(U/mg prot)	＝[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反总]÷(V 样×Cpr)
      	＝11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷Cpr

      需要另外测定，建议使用BCA蛋白法含量测试盒(可见分光光度法)。
      
    • 按样本鲜重计算
      

      SOD活性(U/g鲜重)	＝[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V反总]÷(W×V样÷V样总)
      	＝11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷W

    • 按细菌或细胞个数计算
      

      SOD活力(U/104cell)	＝[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V反总]÷(500×V样÷V样总)
      	＝0.0228×抑制百分率÷(1－抑制百分率)

  
  V_反总：反应体系总体积，1.026mL；V_样：加入反应体系中样本体积，0.09mL；
  V_样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
  W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万