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生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。

超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO^2－，NO^2－在对氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，根据ΔA值可以计算样品中O₂^－含量，反应式如下。

• 吸光值大于2，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
  
• 样品制备好之后，立刻进行测定，请勿将样品进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。
  
• 试剂四（自备氯仿）有一定的毒性，请操作时做好防护措施。

• 植物、动物组织：组织质量(g)与提取液体积(mL)按照1∶5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰上待测。。
  
• 细菌、真菌：细胞数量(10⁴个)与提取液体积(mL)按照500～1000∶1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰上待测。
  
• 血清或培养液：直接测定。

• 按下表加入各成分：
  

  成分(μL)	空白管	测定管
  样本		500
  提取液	500
  试剂一	400	400

• 混匀，37℃水浴20min。
  
• 按下表加入各成分：
  

  成分(μL)	空白管	测定管
  试剂二	300	300
  试剂三	300	300

• 混匀，37℃水浴20min。
  
• 加入500μL试剂四。
  
• 混匀，8000g，25℃，离心5min，小心吸取上层水相1mL，1mL玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定A530。ΔA=A测定-A空白，空白管只要做一管。

• 组织样本：
  
  • 按照样本质量计算
    超氧阴离子含量(nmol/g鲜重)=(ΔA+0.0027)÷0.0242×V_反总÷(V_样÷V_样总×W)×2=148.76×(ΔA+0.0027)÷W
    超氧阴离子产生速率(nmol/g·min)=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T=7.44×(ΔA+0.0027)÷W
    
  • 按照蛋白质浓度计算
    超氧阴离子含量(nmol/mg prot)=(ΔA+0.0027)÷0.0242×V_反总÷(V_样×Cpr)×2=148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr
    超氧阴离子产生速率(nmol/mg prot·min)=148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T=7.44×(ΔA+0.0027)÷Cpr
• 细菌、真菌样本：
  超氧阴离子含量(nmol/10⁴ cell)=(ΔA+0.0027)÷0.0242×V_反总÷(V_样÷V_样总×细胞数量)×2=148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量
  超氧阴离子产生速率(nmol/10⁴ cell·min)=148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量÷T=7.44×(ΔA+0.0027)÷细胞数量
• 血清或培养液：
  超氧阴离子含量(nmol/mL)=(ΔA+0.0027)÷0.0242×V_反总÷V_样×2=148.76×(ΔA+0.0027)
  超氧阴离子产生速率(nmol/mL·min)=148.76×(ΔA+0.0027)÷T=7.44×(ΔA+0.0027)