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PPO（EC1.10.3.1）主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。

PPO能够催化邻苯二酚产生醌，后者在525nm有特征光吸收。

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

• 细菌或培养细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量(10⁴个)∶提取液(mL)＝500～1000∶1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
  
• 组织样本：按照组织(g)∶提取液(mL)＝1∶5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
  
• 血清（浆）或果汁样本：按照血清(浆)或果汁(mL)∶提取液(mL)＝1∶5～10的比例（建议取0.1mL血清（浆）或果汁加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

• 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至525nm，蒸馏水调零。
  
• 样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）
  

  成分(μL)	测定管	对照管
  样本	50
  煮沸的样本		50
  试剂一	200	200
  试剂二	50
  蒸馏水		50

  每个测定管需要设一个对照管，可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行5min 95℃水浴处理。
  
  
• 37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）中准确水浴10min（酶促反应时间）后，95℃水浴5min（终止酶促反应），冷却至室温，10000g，25℃离心10min，收集上清，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，525nm处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA＝A _测定－A_对照。

• 用微量石英比色皿测定
  
  • 血清（浆）或果汁PPO活性
    单位的定义：每分钟每mL血清（浆）或果汁在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.01为一个酶活力单位。
    
    PPO（U/mL）=ΔA×V_反总÷(V_液×V_样÷V_样总)÷0.01÷T =60×ΔA÷V_液
    
    
  • 组织、细菌或细胞PPO活性
    
    • 按样本蛋白浓度计算：
      单位定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.01为一个酶活力单位。
      
      PPO（U/mg prot）=ΔA×V_反总÷（V_样×Cpr）÷0.01÷T =60×ΔA÷Cpr
      
      此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
      
    • 按样本鲜重计算：
      单位定义：每分钟每g组织在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.01为一个酶活力单位。
      
      PPO（U/g鲜重）=ΔA×V_反总÷(W×V_样÷V_样总)÷0.01÷T =60×ΔA÷W
      
      
    • 按细菌或细胞密度计算：
      单位定义：每分钟每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.01为一个酶活力单位。
      PPO（U/10⁴ cell）=ΔA×V_反总÷(500×V_样÷V_样总)÷0.01÷T =0.12×ΔA
  
  V_反总：反应体系总体积，0.3mL；V_液：加入血清（浆）或果汁体积，0.1mL；V_样：加入样本体积，0.05mL；V_样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
• 用96孔板测定
  
  • 血清（浆）或果汁PPO活性
    单位的定义：每分钟每mL血清（浆）或果汁在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。
    
    PPO（U/mL）=ΔA×V_反总÷(V_液×V_样÷V_样总)÷0.005÷T=120×ΔA÷V_液
    
    
  • 组织、细菌或细胞PPO活性
    
    • 按样本蛋白浓度计算：
      单位定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。
      
      PPO（U/mg prot=ΔA×V_反总÷（V_样×Cpr）÷0.005÷T =120×ΔA÷Cpr
      
      此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
      
    • 按样本鲜重计算：
      单位定义：每分钟每g组织在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。
      
      PPO（U/g鲜重）=ΔA×V_反总÷(W×V_样÷V_样总)÷0.005÷T =120×ΔA÷W
      
      
    • 按细菌或细胞密度计算：
      单位定义：每分钟每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。
      PPO（U/10⁴ cell）=ΔA×V_反总÷(500×V_样÷V_样总)÷0.005÷T =0.24×ΔA
  
  V_反总：反应体系总体积，0.3mL；V_液：加入血清（浆）或果汁体积，0.1mL；V_样：加入样本体积，0.05mL；V_样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。