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本试剂盒主要用于植物组织中叶绿素、类胡萝卜素的提取以及以分光光度计定量检测叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素、类胡萝卜素含量。

类胡萝卜素不溶解于水，而溶于有机溶剂，以有机溶剂粗提类胡萝卜素，根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度(A)与其中溶质浓度(C)和液层厚度(L)成正比，即A=αCL，其中α为比例常数，当溶液浓度以百分比浓度为单位，层液厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数，在该试剂盒情况下叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素分别在665nm、649nm、470nm处有最大吸收波，根据经验公式可计算出叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素、类胡萝卜素含量。

• 为避免叶绿素和类胡萝卜见光分解，操作时应尽量避光，研磨或匀浆时应尽量缩短时间。
  
• 若不确定组织中有无叶绿素影响，可取提取液用分光光度计在波长600-700nnm下进行波长扫描，若有波峰，则证明样品中有叶绿素，反之则无。
  
• 当样品吸光值大于1时，可适当稀释后再进行测定，计算时乘以稀释倍数。
  
• 若采用聚苯乙烯材质的96孔板测定，则应在加样5min内测定完毕。
  
• Carotenoid Assay Buffer易挥发，不用时需拧紧瓶盖。
  
• 色素提取液不能出现浑浊现象，否则应重新过滤。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 类胡萝卜素提取：
  
  • 取菠菜或其他植物新鲜叶片，洗净，擦干，去中脉，称取剪碎的新鲜样品0.1g，置于研钵或匀浆器，加入少量提取粉剂(约50mg)和1mL Carotenoid Assay Buffer，研磨或匀浆成液态。
    
  • 将研磨液或匀浆液转移至10mL离心管，用少量Carotenoid Assay Buffer冲洗研钵或匀浆器数次，最后连残渣一同倒入10mL离心管，补加Carotenoid Assay Buffer至10mL，混匀，避光放置5min～2h。
    
    • 也可将组织剪碎，加入Carotenoid Assay Buffer，避光放置12～36h，期间晃动数次，使组织与提取试剂充分接触，当组织接近白色，即表示色素提取完成，如果仍有较多组织颜色，应继续浸提至组织残渣颜色接近于白色。
• 滤纸或三层纱布过滤，留取滤液，也可采用4000r/min离心5min，取上清液待测。
  
• Carotenoid测定：
  
  • 新鲜植物叶片或其他绿色植物组织(含叶绿体)类胡萝卜素含量测定：
    分光光度计开机预热30min以上，调节多波长至665nm、649nm和470nm；取类胡萝卜素提取液加入光径为1cm比色皿中，以Carotenoid Assay Buffer调零，分别用分光光度计测定提取液在665nm、649nm、470nm处的吸光度(A₆₆₅、A₆₄₉、A₄₇₀)。
    
  • 黄色或其他非绿色植物组织(不含叶绿体)类胡萝卜素含量测定：
    分光光度计开机预热30min以上，调节波长至440nm；取类胡萝卜素提取液加入光径为1cm比色皿中，以Carotenoid Assay Buffer调零，用分光光度计测定提取液在440nm处吸光度(A₄₄₀)。

• 新鲜植物叶片或其他绿色植物组织(含叶绿体)类胡萝卜素含量计算：
  叶绿素a含量(mg/g)＝C_a×V×N/(W×1000)
  叶绿素b含量(mg/g)＝C_b×V×N/(W×1000)
  总叶绿素含量(mg/g)＝C_T×V×N/(W×1000)
  类胡萝卜素含量(mg/g)＝C_C×V×N/(W×1000)
  C_a＝13.95×A₆₆₅－6.88×A₆₄₉ (mg/L)
  C_b＝24.96×A₆₄₉－7.32×A₆₆₅ (mg/L)
  C_T＝6.63×A₆₆₅+18.08×A₆₄₉ (mg/L)
  C_C＝(1000×A₄₇₀－2.05×C_a－114.8×C_b)/245(mg/L)＝(1000×A₄₇₀－2851.304×A₆₄₉ +811.7385×A₆₆₅)/245(mg/L)
  V＝类胡萝卜素提取液体积(ml)＝10(ml)
  N＝稀释倍数
  W＝样品鲜重或干重(g)
  1000＝ml与L的单位换算
  
• 黄色或其他非绿色植物组织(不含叶绿体)类胡萝卜素含量计算：
  类胡萝卜素含量(mg/g)＝A₄₄₀/(250×1)×V×N×1000/W＝0.04×A₄₄₀×N/W
  V＝类胡萝卜素提取液体积＝0.01(L)
  N＝稀释倍数
  W＝样品鲜重或干重(g)
  250＝类胡萝卜素经验消光系数(L/g/cm)
  1000＝g与mg的单位换算
  1＝比色皿的光径(cm)