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本试剂盒主要用于定量检测植物组织或果实中可滴定酸(如苹果酸、柠檬酸、酒石酸、草酸等)的含量。

根据酸碱中和原理进行的，即用已知浓度的氢氧化钠溶液滴定待测样品，根据氢氧化钠的消耗量计算待测样品中可滴定酸的含量。

有机酸存在于多种生命体中，植物组织或果实中有机酸种类和数量因植物组织或果实种类和品种而异，进而影响果实的口味、酸糖比、耐储性，植物组织或果实中含有苹果酸、柠檬酸、酒石酸、草酸等多种有机酸。

组分	规格	保存
试剂(A):TA Lysis Buffer(10×)	250mL	RT
试剂(B):TA滴定液(0.1mol/L)	2×250mL	RT
试剂(C):TA标定液	150mL	4℃
试剂(D):酚酞指示剂	5mL	RT

保存：按标签指示条件保存，有效期6个月。

• 实验材料：桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织
  
• 研钵或匀浆器、滤纸或纱布、离心管或试管、三角瓶、滴定管、容量瓶
  
• 水浴锅、离心机、pH计、蓝色石蕊试纸
  
• 滴定分析用蒸馏水（无CO₂，无NH3）

• 实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20℃。
  
• 实验用蒸馏水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷却后的蒸馏水，并盖紧瓶口。
  
• TA滴定液为碱性溶液，有腐蚀性，请小心操作。
  
• TA标定液容易长菌，宜4℃保存，一旦发现有絮状物请弃用。
  
• 果实中含酸量较少时可将TA滴定液适当稀释后使用，可考虑用0.01~0.05M TA滴定液进行滴定。
  
• TA滴定液含量计算公式中，V0最好为3次空白测定的平均值。
  
• 如果所测样品的浓度过高，应用TA Lysis Buffer工作液稀释样品后重新测定，并将稀释倍数带入公式。
  
• 如果样品颜色较深，滴定终点不易观察，应采用电位滴定法。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 配制TA Lysis Buffer工作液：取适量的TA Lysis Buffer(10×)，按TA Lysis Buffer(10×)∶蒸馏水=1∶9的比例混合，即为TA Lysis Buffer工作液。
  
• 准备样品：取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品5g，置于研钵或匀浆器，加入10mL TA Lysis Buffer工作液，充分研磨或匀浆后转入三角瓶，用少量TA Lysis Buffer工作液冲洗研钵或匀浆器，一并转入三角瓶，补加TA Lysis Buffer工作液约30mL，混匀，(置于80℃恒温水浴锅)静置浸提30min，期间搅拌数次。(冷却后)用滤纸或纱布过滤(也可4000r/min离心10min)，留取滤液(或上清液)转入50mL容量瓶中，用TA Lysis Buffer工作液冲洗残渣2～3次，合并滤液并定容至50mL，充分混匀，即为可滴定酸提取液，4℃保存待用。
  
• 标定TA滴定液：取20mL TA标定液，滴加50μL酚酞指示剂，用TA滴定液(0.1mol/L)
  滴定至溶液呈粉红色；按如下公式计算TA滴定液准确浓度:
  
  TA滴定液准确浓度(n_b,mol/L)=0.24/(TA滴定液所用毫升数×0.2042)
• 滴定测定：取10mL可滴定酸提取液加至三角瓶，滴加50μL酚酞指示剂，用已经标定好的TA滴定液进行滴定至溶液初现粉红色并在0.5min内不褪色为终点，记录TA滴定液的用量；以TA Lysis Buffer工作液代替可滴定酸提取液进行滴定，作为空白对照。

根据TA滴定液消耗量，计算样品中可滴定酸含量，以百分比表示。计算公式如下：
可滴定酸含量(%)={V×n_b×f×(V₁-V₀)×100%}/(W×V_S)
100g样品鲜重中可滴定酸含量(g/100g)={V×n_b×f×(V₁-V₀)×100}/(W×V_S)
V=样品提取液的总体积(ml)
n_b =标定后的TA滴定液摩尔浓度(mol/L=mmol/mL)
V₁=滴定提取液所用的TA滴定液的体积(ml)
V₀=滴定蒸馏水所用的TA滴定液的体积(ml)
W=样品鲜重(g)
V_S=滴定时所取滤液(可滴定酸提取液)的体积(ml)，本实验中Vs=10mL
f=折算系数(1mmol TA滴定液换算为有机酸克数的系数，g/mmol)


如果提取液颜色影响滴定终点的确定，可在蓝色石蕊试纸上加1滴蒸馏水和1滴提取液，当试纸不再变红时为终点；除此之外还可用pH计测定，以避免提取液颜色对确定终点的影响；其方法如下：将pH计的电极进入提取液中，边搅拌边滴加TA滴定液，记录pH的变化，以滴加滴定液的体积为横坐标，pH为纵坐标，制作酸碱滴定曲线，滴定曲线的两个“滴定拐点”间的中点即为滴定终点。
有些果蔬样品提取液滴定至近终点时出现黄褐色，这时可加入提取液体积的1～2倍热水稀释，加入酚酞指示剂0.5～1mL，再继续滴定，使酚酞变色易于观察。
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