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本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量测定。本试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式C27H46O，分子量为3860.65，胆固醇广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。

胆固醇及其脂在强酸存在下与邻苯二甲醛反应，产生紫红色化合物，该化合物在550nm波长处有最大吸收峰，分光光度计在550nm处进行比色测定，胆固醇含量在4mg/mL之内与吸光度呈良好线性关系。

• 操作简便，无需将胆固醇单独抽提出来或去除样品中的蛋白质。
  
• 灵敏度高。
  
• 稳定性好。

• 蒸馏水、浓硫酸、生理盐水或PBS
  
• 试管或离心管、分光光度计、比色皿

• 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。
  
• 本法可直接用于检测脑脊液中的TC含量，也可直接检测尿液中的TC含量。
  
• 待测样本如不能及时测定，应置于2～8℃保存，3天内稳定。
  
• 如果样本TC浓度过高，结果可能呈假性降低，应用生理盐水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 样本处理：
  
  • 血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分离出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。
    
  • 细胞样本：
    
    • 取适量的细胞(一般推荐>10⁶以上)，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。
      
    • 用PBS或生理盐水清洗1～2次，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。
      
    • 加200～300μL的PBS或生理盐水匀浆，冰浴超声破碎细胞，功率300W，每次3~5s，间隔30s，重复3～5次；
      
      • 亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心；
        
      • 亦可用1～2% Triton X-100冰浴30～60min，制备好的裂解液不可离心。
  • 组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)∶生理盐水=1∶4的比例，加入生理盐水，冰浴条件下手动或机械匀浆，2500～3000g离心10min，取上清待用。
• 配制胆固醇标准工作液：按胆固醇标准(1mg/mL)∶TC Assay Buffer=1∶9的比例准确混合，即为胆固醇标准工作液(0.1mg/mL)，然后按下表依次稀释胆固醇标准工作液。
  

  加入试剂(mL)/管号	0	1	2	3	4
  胆固醇标准工作液(0.1mg/mL)	0	0.06	0.12	0.18	0.24
  TC Assay Buffer	0.24	0.18	0.12	0.06	0
  总胆固醇浓度(mg/mL)	0	0.06	0.12	0.18	0.24

• 配制邻苯二甲醛工作液：取1瓶(10mg)邻苯二甲醛粉剂的准确加入邻苯二甲醛稀释液
  10mL，充分混匀，即为邻苯二甲醛工作液；4℃避光保存，2周有效。
  
• 配制强酸工作液：取适量的浓硫酸加入到等量的TC Assay Buffer中混合，即为强酸工作液。
  
  • 本试剂盒不提供浓硫酸，需用户自备，二者混合时一定小心操作，以免误伤自己，配制好的强酸工作液中的硫酸含量应准确，否则有可能影响显色效果。
• 胆固醇加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
  

  加入试剂(mL)	空白管	标准管	测定管
  蒸馏水	0.006	0.006	-
  系列胆固醇标准工作液(0～4号)	-	0.24	-
  待测血清或其他样本	-	-	0.006
  TC Assay Buffer	0.24	-	0.24
  邻苯二甲醛工作液	0.12	0.12	0.12
  强酸工作液	2.4	2.4	2.4

• 胆固醇测定：充分混匀，静置10min，1cm比色杯，以分光光度计测定550m吸光度，以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。