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本制品可用于测定花生、牛肉、沙丁鱼、保健品等食品中的CoQ₁₀的含量，科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

待测样品在碱性条件下，EC取代了CoQ₁₀上的甲氰基，形成蓝色化合物，通过分光光度计或酶标仪测定620nm处吸光度值，根据标准曲线即可测出辅酶Q₁₀的含量。

辅酶Q(Coenzyme Q，CoQ)是一种生物体内广泛存在的脂溶性醌类化合物，故又称泛醌，在体内呼吸链中质子移位及电子传递中起重要作用，是呼吸链中重要的递氢体，它是细胞呼吸和细胞代谢的激活剂，也是重要的抗氧化剂和非特异性免疫增强剂。对多种酶有激活作用。不同生物体来源的辅酶Q其侧链异戊烯单位的数目不同，人类和哺乳动物是10个异戊烯单位，故称辅酶Q₁₀。辅酶Q₁₀是辅酶Q类的重要成员之一，它们与线粒体内膜相结合，广泛参与体内的生物代谢过程。

辅酶Q₁₀不仅能给心脏提供动力，还具有卓越的抗氧化、清除自由基功能，能预防血管壁脂质过氧化，预防动脉粥样硬化，并且无任何毒副作用。具体作用体现在以下四个方面。

• 帮助保护心脏辅酶Q₁₀有助于为心肌提供充足氧气，预防突发性心脏病，尤其在心肌缺氧过程中辅酶Q₁₀发挥关键性改善作用。
  
• 保护皮肤长期使用辅酶Q₁₀能够有效防止皮肤衰老，减少脸部皱纹。
  
• 抗疲劳辅酶Q₁₀使细胞保持良好健康的状态，因而机体充满活力，精力旺盛，脑力充沛。它是细胞自身产生的天然抗氧化剂和细胞代谢启动剂，具有保护和恢复生物膜结构的完整性、稳定膜电位作用，是机体的非特异性免疫增强剂，因此显示出极好抗疲劳作用。
  
• 防癌抗癌研究表明，辅酶Q₁₀有抗肿瘤作用，临床对于晚期转移性癌症有一定疗效。

• 无水乙醇、蒸馏水、三氯甲烷或正己烷等提取试剂
  
• 电子天平、烧瓶、水浴锅、分光光度计、比色杯、超声波

• CoQ₁₀标准(1mg/mL)、CoQ₁₀ Assay buffer如果出现浑浊可超声波助溶后再进行标准浓度稀释。
  
• 待测样品中不能含有CoQ₁₀抑制剂，同时需避免反复冻融。
  
• 在皂化过程中，震荡不要剧烈，以免形成乳化层。
  
• EC solution有一定毒性，请小心操作。
  
• 检测标准品时，按步骤2表格混合后，2min内即出现明显的蓝色变化并逐渐加深，20min后蓝色开始变浅，30min后逐渐呈黄绿色。620nm检测数据表明，随着时间的延长，OD值在不断的下降，对应的颜色也已发生变化，特别是高浓度的标准品变化比较大。因此，应在出现最深的蓝色结果且稳定的时间段内尽快检测，而且建议每次同时检测标准品(0.5～1mg/mL)和样品。如有条件，最好用酶标仪检测，减少因检测时间导致的误差。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 准备样品：
  
  • 新鲜动物心脏或肝脏样品：用醇碱皂化法、溶剂皂化法等提取(方法见附录参考)。
    
  • 动物血清样品：0.1mL血清加入0.9mL三氯甲烷，持续摇动30min以上，使CoQ₁₀充分提取出来。如果检测结果较低，可以降低三氯甲烷的加入量。
    
  • 细胞样品：取一定数量的细胞加入生理盐水或PBS，用匀浆器匀浆或超声破碎处理，高速离心，留取上清。后续参考血清样品操作。
    
  • 保健食品：参考GB/T 22252-2008 《保健食品中辅酶Q10的测定》中样本的提取方法。具体如下：根据试样中CoQ₁₀含量，称取1～5g均匀试样(精确至0.001g)，置于25mL棕色容量瓶中，加正己烷20mL，超声提取20min后，加正己烷至刻度，摇匀，量取1.0mL上述溶液于10mL棕色容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，混匀，0.45μm滤膜过滤，滤液备用。
    
  • 酵母菌等发酵菌体样品：用醇碱皂化法提取，提取方法参考如下：将湿菌体移入150mL圆底烧瓶，加入0.7g焦性没食子酸、2.5g氢氧化钾、19mL甲醇和7mL蒸馏水，混匀。90℃水浴锅中回流30min，迅速冷却至室温，倒入分液漏斗中，加入石油醚(正己烷、三氯甲烷或丙酮)等有机溶剂40mL，剧烈震荡5min，萃取CoQ₁₀，连续萃取2次，合并萃取液，用蒸馏水洗涤至中性，加入5g无水硫酸钠干燥。用旋转蒸发仪50℃浓缩至浓稠液，加入10mL无水乙醇，放入冰箱冷冻析出胆固醇等杂质，过滤，滤液定容至100mL待用。
• CoQ₁₀加样：按照下表设置空白管、标准管和测定管，溶液应按顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的CoQ₁₀浓度过高，可减少样品用量或用EC buffer稀释后再进行测定。
  

  成分	空白管	标准管	测定管
  EC buffer	2	1.75	1.75
  CoQ10标准(1mg/mL)	-	0.25	-
  待测样品(提取液)	-	-	0.25
  EC solution	0.5	0.5	0.5
  CoQ10 Assay buffer	0.5	0.5	0.5

• CoQ₁₀测定：混匀，室温避光孵育3～5min，以空白管调零，比色杯光径1cm，分光光度计620nm(600～640nm亦可)处测定标准管或测定管的吸光度。

• 方法一：醇碱皂化法
  
  • 皂化液的制备：取猪心残渣，压干称重，按干渣重加300g/L工业焦性没食子酸，搅匀，加醇-碱溶液(干渣重3～3.5倍量乙醇、320g/L氢氧化钠)，加热搅拌回流25～30min，迅速冷却至室温，得皂化液。
    
  • 浓缩液的制备：取皂化液，立即加入其体积1/10量的石油醚或120号汽油提取3～4次，搅拌，分层，得提取液。水洗至近中性，在40℃以下浓缩至原体积的1/10，冷却，-5℃以下静置过夜，过滤，得浓缩液。
    
  • 辅酶Q₁₀精制品的制备：将浓缩液过硅胶柱层析，先后用石油醚、10%乙醚-石油醚洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得黄色油状物。加热无水乙醇溶解，过滤，滤液静置，冷却结晶，真空干燥，得辅酶Q₁₀精制品。
• 方法二：醇醚混合溶剂提取法
  • 辅酶Q₁₀粗制品的制备：取猪心残渣，加1.5倍量的V乙醇：V乙醚=3：1混合溶剂，加热提取3～4次，每次15～20min，冷至室温，过滤，合并提取液。浓缩，加适量水，加石油醚提取，提取液浓缩，浓缩物为黄色油状物，即辅酶Q₁₀粗制品。
    
  • 辅酶Q₁₀成品的制备：取辅酶Q₁₀粗制品，加丙酮溶解，置-10℃以下析出杂质，过滤，滤液蒸去丙酮，加少量石油醚溶解，过硅胶柱层析分离，加无水乙醇结晶，得辅酶Q₁₀成品。