产品货号：
GL2032
中文名称：
抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒(PNP微板法)
英文名称：
Tartrate Resistnt Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit
产品规格：
120T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
背景资料：
检测原理：
产品组成：
保存：按标签指示条件保存，有效期1年。
用户自备：
注意事项：
用法参考：
计算方法：
以系列标准品(1～6号)浓度0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mM为横坐标，以对应的标准孔吸光度为纵坐标，绘制标准曲线y=ax+b，根据测定孔的吸光度在标准曲线上查得待测样品对硝基酚的生成量x=(ΔA405-b)÷a，单位为mM。
组织和细胞样本抗酒石酸酸性磷酸酶活性单位的定义：在pH4.8、37℃条件下，每克组织或细胞蛋白每分钟催化底物生成1μmol对硝基酚所需要的TRAP的酶量为一个活力单位。公式如下：
血清(浆)和尿液样本抗酒石酸酸性磷酸酶活性单位的定义：在pH4.8、37℃条件下，每升血清(浆)或尿液每分钟催化底物生成1μmol对硝基酚所需要的TRAP的酶量为一个活力单位。公式如下：
a：标曲斜率；b：标曲截距；
N：样本加入反应体系前的稀释倍数；
1000：单位换算，1mmol/L=1000μmol/L；
Cpr：样品蛋白浓度，gprot/L；
t：酶促反应时间，min；
ΔA405：样本绝对OD值(测定OD值-对照OD值)；
y：标准品OD值-空白孔OD值。
相关搜索：抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒(PNP微板法)，TRAP检测，抗酒石酸酸性磷酸酶检测
本试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的TRAP活性。仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
背景资料：
酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH值为4.5～5.5；存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase，TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液，血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态，几乎被认为是是机体破骨活性的唯一血液指标，TRAP是一种糖基化的含金属蛋白酶，在破骨细胞(osteoclast)和破软骨细胞(chondroclast)中高表达，在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。
检测原理：
利用p-nitrophenyl phosphate(pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下可在ACP的作用下生成p-nitrophenol (p-NP)；在碱性条件下p-NP呈黄色，黄色越深说明ACP活性越高，反之则酶活性越低，在400～415nm处有最大吸收；在适量的酒石酸存在的情况下进行ACP活性检测，得到的ACP活性就是TRAP的活性，根据p-NP的生成量即可计算出TRAP的活性水平。
产品组成：
| 组分 | 规格 | 保存 |
| TRAP Assay Buffer | 30mL | 4℃ |
| Tartrate Solution | 1mL | |
| pNPP | 2支 | -20℃，避光 |
| p-nitrophenol(10mM) | 0.5mL | |
| Stopping Solution | 20mL | RT |
保存：按标签指示条件保存，有效期1年。
用户自备：
- PBS或生理盐水
- 离心机、离心管、水浴锅或恒温箱、96孔板、酶标仪
注意事项：
- 待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
- 如果待测样品体积较少，可减少样品加样量，以TRAP Assay Buffer补至20μL。
- 如果无法检测405nm，亦可检测400～415nm范围内吸光度。
- 建议每次测定时都做标准曲线，以使标准更准确，另外标准品避免反复冻融。
- 待测样品中抗酒石酸酸性磷酸酶活性较低时，可适当延长孵育时间至30min。
- 检测组织和细胞样品时，需测定总蛋白浓度，推荐使用BCA蛋白定量试剂盒。
- 配制1支显色工作液后应当日用完，因此请注意适当多准备一些样品一起检测。
- p-nitrophenol溶液对人体有害，Stopping Solution有腐蚀性，请小心操作。
- 如果希望进行酶活性的绝对定量，进行酶反应时应精确计时，此时推荐采用孵育30min或更长时间，以减小操作过程中的时间误差。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
用法参考：
- 准备样品：
- 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可直接用于测定，尿液通常也可以直接用于测定，来不及检测可-80℃冻存，但不宜反复冻融。
- 组织样品：按照组织样本质量(g)∶生理盐水体积(ml)＝1∶10匀浆，离心后取上清待测，留取部分上清进行BCA蛋白浓度测定。
- 细胞样品：按细胞数量(106)∶生理盐水体积(ml)＝5∶1匀浆，离心后取上清待测，留取部分上清进行BCA蛋白浓度测定。
- 样本的稀释：正式检测前，需选择2～3各预期差异大的样本稀释成不同浓度进行预实验，根据预实验的结果，结合本试剂盒的线性范围(5.0～300U/L)，使用PBS或生理盐水稀释后再行检测。
- 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可直接用于测定，尿液通常也可以直接用于测定，来不及检测可-80℃冻存，但不宜反复冻融。
- 配制显色工作液：取1支pNPP用0.25mL去离子水溶解，置于冰上待用，未用完部分-20℃避光保存2天；按1∶20的比例加入TRAP Assay Buffer，混匀即成，置于冰上避光待用，新配制的显色工作液6h内有效。
- 配制系列标准品：取出p-nitrophenol(10mM)恢复至室温，按p-nitrophenol(10mM)∶TRAP Assay Buffer＝1∶19的比例混合，使浓度达到0.5mM，按下表继续稀释：
成分(μL) 1 2 3 4 5 6 p-nitrophenol(0.5mM) 2 4 8 12 16 20 TRAP Assay Buffer 18 16 12 8 4 0 标准品浓度(mM) 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 - TRAP加样：按按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔和对照孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的TRAP活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行孔。
成分(μL) 空白孔 标准孔 测定孔 对照孔 TRAP Assay Buffer 20 — — 40 系列标准品(1～6号) — 20 — — 待测样品 — — 20 20 显色工作液 40 40 40 — Tartrate Solution 4 4 4 4 - TRAP测定：轻轻混匀，37℃孵育10min，每孔加入160μL Stopping Solution终止反应；酶标仪测定405nm处各管的吸光度。
计算方法：
以系列标准品(1～6号)浓度0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mM为横坐标，以对应的标准孔吸光度为纵坐标，绘制标准曲线y=ax+b，根据测定孔的吸光度在标准曲线上查得待测样品对硝基酚的生成量x=(ΔA405-b)÷a，单位为mM。
组织和细胞样本抗酒石酸酸性磷酸酶活性单位的定义：在pH4.8、37℃条件下，每克组织或细胞蛋白每分钟催化底物生成1μmol对硝基酚所需要的TRAP的酶量为一个活力单位。公式如下：
TRAP活力(U/gprot)=x×1000×N÷t÷Cpr
血清(浆)和尿液样本抗酒石酸酸性磷酸酶活性单位的定义：在pH4.8、37℃条件下，每升血清(浆)或尿液每分钟催化底物生成1μmol对硝基酚所需要的TRAP的酶量为一个活力单位。公式如下：
TRAP活力(U/L)=x×1000×N÷t
a：标曲斜率；b：标曲截距；
N：样本加入反应体系前的稀释倍数；
1000：单位换算，1mmol/L=1000μmol/L；
Cpr：样品蛋白浓度，gprot/L；
t：酶促反应时间，min；
ΔA405：样本绝对OD值(测定OD值-对照OD值)；
y：标准品OD值-空白孔OD值。
相关搜索：抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒(PNP微板法)，TRAP检测，抗酒石酸酸性磷酸酶检测