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本试剂盒可用于测定人体、动物的血浆、血清、尿液等样品中的尿素含量，但尿液最好经过处理后再行检测。

尿素酶水解尿素，产生氨和二氧化碳，氨在碱性条件下与苯酚等反应生成蓝色吲哚酚，吲哚酚的生成量与尿素含量呈正比，通过分光光度计测定560nm处吸光度。

尿素(Urea)又称碳酰胺(carbamide)，是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白质代谢分解的主要含氮终产物，也是目前含氮量最高的氮肥；尿素检测方法大致分为化学方法和酶学方法，后者被认为是间接方法，先经尿素酶(脲酶)分解尿素为铵离子，然后根据波氏反应检测铵离子的生成量。

• 无氨蒸馏水
  
• 水浴锅或恒温箱、离心管或小试管、分光光度计、比色杯、沸石

• 本实验可测定560和630nm处的吸光度。
  
• 如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，但应注意加入试剂量不同，相应的检测次数会大大增加。
  
• 避免使用铵盐抗凝剂，否则会使结果偏高。
  
• 高浓度氟化物可抑制尿素酶，引起结果假性偏低。
  
• 采用酶标仪未调零情况下，空白管OD值一般在0.08～0.18之间，5mmol/L标准管参考范围一般在0.35～0.55之间。
  
• 以肉眼观察，一般情况下尿素浓度≤1mmol/L可显淡绿色或淡蓝色，浓度≥2mmol/L即可显蓝色，浓度≥15mmol/L即可显深蓝色，一般情况下接近上限比接近下限更准确。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 准备样品：
  
  • 血浆、血清：血浆、血清按照常规方法制备，直接用于尿素的测定，-20℃冻存。
    
  • 尿液：尿液样品最好处理后测定，方法如下：取0.6mL尿液样品，加入沸石0.3g，加入无氨蒸馏水至15mL，反复震荡数次，吸附尿液中的游离铵盐，静置后，吸取稀释尿液，所测结果乘以25，如果尿液比较少，可以等比例减少各试剂的使用量。举例：取1mL尿液样品，应加入沸石0.5g，加入无氨蒸馏水至25mL，反复震荡数次，吸附尿液中的游离铵盐，静置后，吸取稀释尿液，所测结果乘以25。
• 配制标准品工作液：取适量的尿素标准(100mmol/L)，按尿素标准(100mmol/L)∶ddH2O=1∶19的比例混合，使尿素浓度达到5mmol/L，即为标准品工作液-尿素标准(5mmol/L)；4℃保存，1周有效。
  
• 配制脲酶工作液：取适量的脲酶溶液，按脲酶溶液∶脲酶稀释液=1∶99的比例混合，即为脲酶工作液；4℃避光保存，1个月有效。
  
• Urea加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的Urea浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
  

  加入物(ml)	空白管	标准管	测定管
  ddH2O	0.01	—	—
  尿素标准(5mmol/L)	—	0.01	—
  待测样品	—	—	0.01
  脲酶工作液	0.2	0.2	0.2
  充分混匀，37℃水浴15min。
  酚显色液	1	1	1
  Urea Assay Buffer	1	1	1

• Urea测定：充分混匀，37℃水浴20min，分光光度计检测560nm处吸光度，比色杯光径1.0cm，空白管调零，读取各管吸光度，分别为A_标准、A_测定。计算公式如下：
  
  尿素(mmol/L)=(A_测定/A_标准)×5mmol/L