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本试剂盒采用比色法以亚铁嗪为底物对样本中铁进行定量，用于血清、血浆、组织中铁含量的研究检测。

在酸性介质中与转铁蛋白结合的血清铁从转铁蛋白中解离出来，其他样品中的铁在酸性介质环境下也会被解离，再被还原剂还原为Fe²⁺，后者与亚铁嗪生成紫红色化合物，通过酶标仪检测562nm处吸光度，适用于检测血清、血浆、组织等样品中的铁含量；上述检测方法属于直接检测法，应设血清空白，纠正血清本身的色度，根据公式计算出铁含量。

• 在140μmol/L以下线性关系良好，甘油三脂≤3.39mmol/L，胆红素≤171μmol/L，对本法基本无干扰。
  
• 批内差异CV≤3.1%；批间差异CV≤2.6%。

• 溶血样本对检测有干扰，尽量避免采用溶血样本。
  
• 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
  
• 实验过程中用到的水，不可用普通的蒸馏水，尽量采用高纯度的去离子水。
  
• 玻璃器材需要10%的盐酸浸泡24h，取出后用去离子水冲洗后才可以使用。
  
• 避免与铁器接触，以防铁污染。
  
• 标准品呈色24h稳定，血清呈色30min内稳定，随着时间的延长，颜色会慢慢加深，应在1h内比色完毕。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
  
• 本试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 制备样品(选做)：
  
  • 浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，-20℃冻存，用于Fe的检测。
    
  • 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于Fe的检测。
    
  • 高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的Fe，可以使用ddH2O稀释，不宜使用普通蒸馏水稀释。
    
  • 选做：样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的Fe含量。
• 制备铁标准工作液：取适量的铁标准(100μg/mL)，按铁标准(100μg/mL)∶铁标准稀释液=1∶49的比例配制铁标准(2μg/mL)，即为铁标准工作液；4℃避光保存，3个月有效。
  
• 加样：选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的96孔板，按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的铁离子含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行孔。
  

  加入物(μL)	空白孔	标准孔	测定孔
  ddH2O	75	—	—
  铁标准(2μg/mL)	—	75	—
  待测样品	—	—	75
  Fe Assay Buffer	200	200	200
  混匀，于562nm处，以空白孔调零，读取测定孔的吸光度(A 血清空白)。
  亚铁嗪显色液	8.5	8.5	8.5

• 检测：混匀，室温静置或37℃孵育，以空白孔调零，酶标仪562nm处检测标准孔、测定孔的吸光度(即为A标准，A测定)，1h内比色完毕。