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植物总糖和还原糖检测试剂盒(DNS比色法)可用于定量检测植物组织样品中的总糖和还原糖的含量。

还原糖在碱性加热条件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水杨酸被还原为棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量与棕红色产物的颜色深浅程度呈一定比例关系，在540nm处用分光光度计测定棕红色物质的吸光度，该吸光度值与还原糖含量呈线性关系，利用标准曲线计算样品中的还原糖和总糖的含量。

组分	50T	100T	保存
Glu标准(1mg/mL)	4mL	4mL	4℃
DNS检测液	50mL	100mL	RT，避光
显色液(总糖使用)	5mL	10mL

保存：2～8℃，避光，有效期1年。

• 蒸馏水、盐酸溶液、氢氧化钠溶液
  
• 50mL离心管、5mL离心管、离心机、水浴锅或恒温箱、分光光度计、比色杯

• 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。
  
• 待测样品如不能及时测定，应置于2～8℃保存，3天内稳定。
  
• 如果样品还原糖浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
  
• 总糖计算公式在测定干扰杂质很少、还原糖含量相对总糖含量很少时使用，×0.9是为了从测定出的总糖水解成单糖中，扣除水解时所消耗的水量。
  
• 6M盐酸配制：一般市售的浓盐酸为11.6～12M，用蒸馏水或去离子水与浓盐酸1∶1混合即配制成6M，盐酸溶于水会放热，应小心操作，避免伤人。
  
• 6M氢氧化钠配制：氢氧化钠24g溶解于蒸馏水或去离子水，补至100mL，氢氧化钠溶于水会放热，应小心操作，避免伤人。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 还原糖的提取：
  
  • 称取植物样品0.5～3g，剪碎，加入蒸馏水约3mL匀浆，转移至烧杯或三角瓶中，用12mL蒸馏水冲洗研磨器2～3次，洗出液也转移至该容器。
    
  • 50℃水浴30min，并不时搅拌，以便还原糖彻底浸出。
    
  • 将沉淀和浸出液转移至50mL离心管，4000g离心。
    
  • 留取上清液，向沉淀中加入20mL蒸馏水，混匀，再次4000g离心。
    
  • 留取上清液，将2次获得的上清液合并，用蒸馏水定容至100mL(提取液)，混匀，作为还原糖待测液。
• 总糖的水解和提取：
  
  • 称取植物样品0.5～3g，剪碎，加入蒸馏水约3mL匀浆，转移至烧杯或三角瓶中，用12mL蒸馏水冲洗研磨器2～3次，洗出液也转移至该容器。
    
  • 向容器中加入10mL 6M盐酸溶液，搅拌均匀，煮沸，并不时搅拌。
    
  • 取2滴滴加于载玻片上，滴加1滴显色液(约50μL)，检查水解是否完全，如已经水解完全，则不显示蓝色。
    
  • 水解完毕后，冷却至室温，加入6M氢氧化钠溶液，使溶液pH至7.4，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4000g离心或过滤。
    
  • 取上清或滤液10mL，用蒸馏水定容至100mL，成稀释10倍的总糖水解液(提取液)，取0.5mL总糖水解液，测定其还原糖的含量。
• 稀释葡萄糖标准：取干净离心管或试管，按下表操作，依次获得系列浓度的Glu标准。
  

  加入物质(mL)	1	2	3	4	5
  Glu标准(1mg/mL)	0.1	0.2	0.3	0.4	0.5
  蒸馏水	0.4	0.3	0.2	0.1	0
  标准葡萄糖浓度(mg/ml)	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0

• 加样：取5mL离心管，按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，小心混匀；如果样品中的糖浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2~3平行管，求平均值。
  

  加入物(mL)	空白管	标准管	测定管
  蒸馏水	0.5	-	-
  系列Glu标准(1～5号)	-	0.5	-
  提取液	-	-	0.5
  DNS检测液	1	1	1
  沸水浴中准确煮沸，取出，自来水冷却至室温。补加蒸馏水2.5mL。

• 还原糖测定：混匀，以空白管调零，比色杯光径1cm，分光光度计测定540nm处标准管、测定管的吸光度。

以系列Glu标准(1～5号)，即标准葡萄糖浓度(mg/ml)为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，作图得标准曲线，根据提取液的吸光度在标准曲线上查出相应的葡萄糖浓度。
还原糖的百分含量：
100g样品中还原糖含量(g)=(c×V_T)/(m×1000)×100=(c×V_T)/(m×10)
总糖的百分含量：
100g样品中总糖含量(g)=(c×N×V_T)/(m×1000)×100×0.9=(c×N×V_T)/(m×10)×0.9

c=从标准曲线查的糖量(mg/ml)
V_T=提取液的总体积(ml)=100
m=植物样品的质量(g)
N=总糖水解液的稀释倍数=10
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