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本试剂盒采用光电比色法，原理是在含蔗糖的低离子强度溶液中孵育红细胞，可大大促进补体与红细胞膜的结合，使对补体敏感的红细胞膜上形成小孔，蔗糖水进入红细胞内引起红细胞膜破裂，使PNH对补体敏感的红细胞溶血，主要用于检测人、动物血液的红细胞膜的缺陷，尤其用于鉴定阵发性睡眠性血红蛋白尿症，用光电比色法求出溶血百分比。

• 水浴锅、离心管、离心机
  
• 分光光度计或酶标仪、比色皿或酶标板
  
• 生理盐水、蒸馏水或去离子水
  
• 与患者同血型的正常新鲜血清

• 所用器具必须洁净干燥，以免溶血造成假阴性。
  
• 蔗糖溶液一旦出现污染，应弃用。
  
• 如果正常血清所含补体系统异常，可出现假阴性。
  
• 假阳性：溶血一般不超过5%，可见于自身免疫性溶血性贫血等疾病；如果加入血清量过多，亦可出现假阳性。
  
• 该实验可作为PNH的过筛实验，阴性可排除PNH，阳性应做酸化溶血实验证实。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 制备50%红细胞悬液：取抗凝血，经生理盐水洗涤2～3次，用PNH NaCl Buffer重新悬浮红细胞。
  
• 制备蔗糖盐工作液：提前取出蔗糖盐溶液恢复至室温，按蔗糖盐溶液∶去离子水=1∶4稀释，即为蔗糖盐工作液。
  
• 按下表进行操作：
  

  加入物(ml)	1	2	3	4
  蔗糖盐工作液	0.9	0.95	0.95	—
  50%红细胞悬液	0.05	0.05	—	0.05
  待测血清	0.05	—	0.05	—
  Alkaline Buffer	—	—	—	0.95

• 室温孵育1h，分别加入生理盐水4mL，低速离心，取上清。
  
• 以蒸馏水为空白对照，分光光度计或酶标仪于540nm处测定吸光度，分别命名为A₁、A₂、A₃、A₄。