产品货号：
GS5320
中文名称：
16S rDNA细菌菌种鉴定PCR试剂盒
英文名称：
16S rDNA Bacterial Identification PCR Kit
产品规格：
50T|100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
产品组成：
保存：-20℃，有效期1年。
引物序列：
注意事项：
使用方法：
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本试剂盒用于PCR扩增细菌16S rDNA，通过对PCR扩增产物DNA片段进行序列分析，可以鉴定所检细菌种类。16S rDNA其序列在物种间具有高度多样性，并由9个可变区和10个保守区组成。其中保守区反映了生物物种间的亲缘关系，而可变区则表明物种间的差异。因此，可利用保守区序列设计引物，将16S rDNA片段扩增出来，利用可变区序列的差异来对不同菌属、菌种的细菌进行分类鉴定。
本试剂盒中包含进行细菌16S rDNA扩增的所有试剂，PCR扩增引物F/R1用于扩增细菌16S rDNA前500bp的DNA片段，F/R2用于全序列DNA片段的扩增。16S rDNA的前500bp序列变化较大，包含有丰富的细菌种属的特异性信息，进行DNA测序时一个测序反应即可测通，是一种较为便捷的16S rDNA鉴定方法；如果前500bp序列不足以反映细菌的种属信息时，则可以进行16S rDNA的全序列PCR扩增及DNA测序，得到较为全面的16S rDNA序列信息。同时提供三条测序引物，包括正向测序引物Seq F，中间测序引物Seq I，以及反向测序引物Seq R。
产品组成：
| 组分 | 50T | 100T | |
| 2×Taq PCR Mix | 1.5mL | 2×1.5mL | |
| PCR primers | F(10μM) | 25μL | 50μL |
| R1(10μM) | 25μL | 50μL | |
| R2(10μM) | 25μL | 50μL | |
| Seq primers | SeqF(10μM) | 25μL | 50μL |
| SeqR(10μM) | 25μL | 50μL | |
| SeqI(10μM) | 25μL | 50μL | |
| Positive Control(1ng/μL) | 20μL | 40μL | |
| 无ddH2O | 2×1mL | 4×1mL | |
保存：-20℃，有效期1年。
引物序列：
| 测序引物名称 | 测序引物序列 |
| SeqF | GAGCGGATAACAATTTCACACAGG |
| SeqR | CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC |
| SeqI | CAGCAGCCGCGGTAATAC |
注意事项：
- 本实验使用试剂较易污染，操作人员应尽可能穿洁净实验服，戴口罩与手套操作，并尽量在超净工作台中进行实验。
- 2×Taq PCR Mix应尽量避免反复冻融。
- 实验所用细菌应保证其为纯菌。
使用方法：
- 模板DNA准备：细菌基因组DNA可以通过传统酚/氯仿抽提法获取，或者使用柱式细菌基因组DNA提取试剂盒进行提取。
- 在无菌洁净的PCR管中，配制下面体系PCR反应溶液：
成分 用量 模板DNA 50～100ng 2×Taq PCR Mix 25μL 引物F 0.5μL 引物R1或引物R2 0.5μL 无菌ddH2O 至50μL - 阴性对照使用1μL无菌ddH2O代替模板DNA。
- 阳性对照取1μL Positive Control作为模板DNA。
- 阴性对照使用1μL无菌ddH2O代替模板DNA。
- PCR反应程序如下：
步骤 温度 时间 循环数 预变性 94℃ 5min 1 变性 94℃ 30sec 30 退火 55℃ 30sec 延伸72℃ 1min 30sec 终延伸 72℃ 10min 1 保存 4℃ ∞ - - 琼脂糖凝胶电泳。PCR产物长度因菌种不同有一定差异，F/R1引物扩增在500bp左右，F/R2引物扩增在1500bp左右，阳性对照对应的在500bp左右或1100bp左右。
- PCR产物回收与DNA测序。使用通用的切胶回收试剂盒进行回收或者使用柱式DNA胶回收试剂盒进行回收。DNA测序500bp序列用Seq F、SeqR引物进行测序，1500bp序列用Seq F、Seq R与Seq I引物进行DNA测序。
- 菌种鉴定。将DNA测序结果与相应的数据库(NCBI、RDP、EBI等)进行比对，确定所检菌种种类。
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