产品货号：
BTN16-39800
中文名称：
大肠杆菌LAMP检测试剂盒(含致病性和非致病性)
英文名称：
E.coli LAMP Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是一种简单快捷的大肠杆菌(大肠埃希氏菌)荧光&可视化双染料LAMP检测试剂盒。
大肠杆菌(E.coli)为埃希氏菌属(Escherichia)代表菌。一般多不致病，为人和动物肠道中的常居菌，在一定条件下可引起肠道外感染。但某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，统称致病性大肠杆菌，又叫致泻性大肠杆菌。根据致病性的不同，这些致泻性大肠埃希菌被分为五种。检测致病性和非致病性大肠杆菌是食品行业(包括饮用水)的一个重要的安全指标，因此快速检测致病性和非致病性大肠杆菌具有重要意义。
保存：-20℃，有效期一年。
引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入200μL超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
一、样品DNA的制备
二、LAMP反应(20μL体系)
三、结果分析
相关搜索：大肠杆菌LAMP检测试剂盒(含致病性和非致病性)，恒温扩增，E.coli LAMP Kit
大肠杆菌(E.coli)为埃希氏菌属(Escherichia)代表菌。一般多不致病，为人和动物肠道中的常居菌，在一定条件下可引起肠道外感染。但某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，统称致病性大肠杆菌，又叫致泻性大肠杆菌。根据致病性的不同，这些致泻性大肠埃希菌被分为五种。检测致病性和非致病性大肠杆菌是食品行业(包括饮用水)的一个重要的安全指标，因此快速检测致病性和非致病性大肠杆菌具有重要意义。
- 即开即用，用户只需要提供DNA样品。
- 恒温扩增，可以不需要荧光PCR等贵重仪器。
- 含可见光和荧光染料，既可以用金属浴和水浴扩增用可见光肉眼判断结果，也可用荧光PCR仪进行实时荧光检测。
- 检测灵敏性一般比PCR高10倍以上。
- 特异性高，根据大肠杆菌(大肠埃希氏菌)保守序列设计4条特异引物，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
- 一般30分钟内出结果，比PCR快。
- 上样量大，对20μL的反应体系，最大样品加样量高达到14μL。
- 内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
- 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
- 本制品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
- 本制品足够50次20μL体系的荧光及可视化LAMP扩增。
- 只可用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 4×LAMP MasterMix(双染料，待加酶) | 200μL |
| Bst DNA聚合酶2.0 | 50μL |
| 20×大肠杆菌LAMP引物干粉 | 50次 |
| 大肠杆菌LAMP阳性对照(104拷贝/μL) | 250μL |
| 超纯水 | 1mL |
保存：-20℃，有效期一年。
引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入200μL超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
一、样品DNA的制备
- 用自选方法纯化样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
- 如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照(PC)和一个样品制备阴性对照(NC)。PC用10μL本试剂盒提供的阳性对照(104拷贝/μL)加一定量的水作为样品制备PC，加水后的总体积跟所用核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。NC用水替代。
二、LAMP反应(20μL体系)
- 反应设置：第一次使用时请把50μL Bst DNA聚合酶2.0加入到4×LAMP MasterMix(双染料，待加酶)中，轻柔颠倒20次充分混匀，然后再取用。如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+4个LAMP扩增，增加LAMP扩增阳性对照和LAMP扩增阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
成分 样品管
N+2个LAMP
阴性对照LAMP
阳性对照4×LAMP MagicMix(加酶后) 各5μL 5μL 5μL 20×大肠杆菌LAMP引物混合液 各1μL 1μL 1μL N+2个样品DNA 各14μL 不加 不加 超纯水 不加 14μL 不加 第2步所得阳性对照的10倍稀释液 不加 不加 14μL - 如果使用金属浴或水浴保温，没有热盖，则每个反应管中加入50μL自备的PCR级石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发到管盖下方凝集，反应体积变化，会严重影响反应效率，增加假阳性率。最后置于65℃保温60分钟进行扩增。
- 如果使用常规PCR仪进行LAMP反应，设置程序时必须打开热盖，设置成65℃保温60分钟进行扩增。
- 如果使用荧光定量PCR仪，则设置60次循环，每次65℃保温1分钟，采集SYBR通道的荧光信号。
三、结果分析
- 电泳分析：由于取样时非常容易产生气溶胶污染，污染实验环境并且非常难清除污染，所以强烈建议不要采取此方法分析实验结果。即使使用，也要在不同的房间，使用不同的移液枪操作。具体做法是取10μL LAMP扩增产物跟自备上样液混合后进行2%琼脂糖凝胶电泳。LAMP阳性对照必须有正常LAMP条带(200bp左右的梯形扩增产物)，LAMP阴性结果必须无条带，否则实验结果无效。如果LAMP阳性对照和阴性对照结果正常，再分析待测样品。典型的电泳结果见下表，奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果：
- 可见光(肉眼)分析：样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的反应液将呈蓝色，样品制备阳性对照和LAMP阴性对照的反应液将呈淡蓝色或无色，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的颜色接近扩增阳性对照管则说明样品为阳性，如果接近阴性对照则说明待测样品为阴性。典型的可将光检测结果见左图(9为阴性，10为阳性)。
- 荧光分析(仅限于用qPCR仪进行反应的场景)：样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的反应液将有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照和LAMP阴性对照的反应液将没呈平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的荧光曲线为S型，则说明样品为阳性，如果为平线则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性，右边为阴性。
相关搜索：大肠杆菌LAMP检测试剂盒(含致病性和非致病性)，恒温扩增，E.coli LAMP Kit