产品货号：
BTN15-90000
中文名称：
申克孢子细菌荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
Sporothrix schenckii qPCR Kit(Probe Method)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品是根据探针法qPCR原理开发检测申克孢子细菌的产品。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)
二、样品DNA的制备
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
五、数据处理
相关搜索：申克孢子细菌荧光定量PCR试剂盒(探针法)，Sporothrix schenckii qPCR Kit(Probe Method)
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 根据申克孢子细菌设计引物和探针，能专一性地检测出申克孢子细菌，但不能检测其他非申克孢子细菌。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
- 本产品只能用于科研。
- 本产品足够50次20μL体系的荧光定量PCR。
| 组分 | 规格 |
| 2×Probe qPCR Magic Mix | 1mL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 申克孢子细菌探针法qPCR引物混合液 | 100μL |
| 申克孢子细菌qPCR探针 | 50μL |
| 申克孢子细菌探针法qPCR阳性对照(1×108拷贝/uL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 用自选方法纯化样品的DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
- 如果有N个样品，则需要进行N+2个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(用第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复)：
成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管曲线样品管
(2～7管)2×Probe qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 申克孢子细菌探针法qPCR探针 1μL 1μL 各1μL 申克孢子细菌探针法qPCR
引物混合液2μL 2μL 各2μL N+2个待测DNA模板 7μL 不加 不加 超纯水 不加 7μL 不加 第7步所得标准曲线样品稀释液(2～7号) 不加 不加 各7μL
四、qPCR反应参数 - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间 预变性 95℃ 5min PCR反应
(40个循环)95℃ 15sec 60℃ 1min(采集FAM通道的荧光信号)
五、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于35。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于35则为阴性，如果小于或等于30则为阳性。如果在30～35之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于35则为阴性，如果小于35，则为阳性。
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