产品货号：
BTN15-66100
中文名称：
超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
ESBL-Escherichia coli qPCR Kit(Probe Method)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
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本产品是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的试剂盒。
超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌(ESBL-Escherichia coli)是一种在医院内感染的常见机会致病菌，各临床科室以及标本类型中均有检出，科室分布以普外科为主，标本类型以伤口分泌物标本为主，常引起外壳感染性疾病，该细菌对多种抗生素有较强的耐药性，所以医院要加强对该细菌的耐药性的检测与监控，积极做好细菌的培养和药物敏感性试验，规范合理使用抗生素，以控制耐药菌的出现和流行，因此快速检测超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌荧光定量PCR试剂盒(探针法)，ESBL-Escherichia coli qPCR Kit(Probe Method)
超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌(ESBL-Escherichia coli)是一种在医院内感染的常见机会致病菌，各临床科室以及标本类型中均有检出，科室分布以普外科为主，标本类型以伤口分泌物标本为主，常引起外壳感染性疾病，该细菌对多种抗生素有较强的耐药性，所以医院要加强对该细菌的耐药性的检测与监控，积极做好细菌的培养和药物敏感性试验，规范合理使用抗生素，以控制耐药菌的出现和流行，因此快速检测超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 引物和探针经过优化，灵敏性高。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据人超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌高度保守的VP1区设计，不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应。
- 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
- 本产品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 0.5mL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌PCR引物 | 100μL |
| 超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌qPCR探针 | 100μL |
| 超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌阳性对照2.0(1×108拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌DNA提取试剂盒或柱式细菌DNA提取试剂盒。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的DNA释放剂，本产品的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。其使用手册可从本公司网站www.bjbalb.com通过搜索产品名称DNA释放剂或产品编号130982下载。
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管曲线样品管
(2～7管)2×Probe qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌qPCR探针 2μL 2μL 各2μL 超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌PCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL 待测样品DNA模板 6μL 不加 不加 第7步所得标准曲线样品稀释液(2～7号) 不加 不加 各6μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间 预变性 94℃ 5min PCR反应
(40个循环)94℃ 0.5min 50℃ 0.5min(采集FAM通道的荧光信号) 72℃ 0.5min 最后延伸 72℃ 10min
四、数据处理
- 以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 电泳检测如果有必要电泳确认，可取10～20μL PCR产物直接在琼脂糖凝胶上电泳产物的大小为400bp。但电泳非常容易污染实验环境，建议不轻易采纳。
相关搜索：超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌荧光定量PCR试剂盒(探针法)，ESBL-Escherichia coli qPCR Kit(Probe Method)