产品货号：
BTN15-34510
中文名称：
肉毒梭状芽孢杆菌荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
Clostridium botulinum qPCR Kit(Probe Method)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品是以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测肉毒梭状芽孢杆菌的试剂盒。
肉毒梭状芽孢杆菌广泛存在于自然界，是一种专性厌氧的腐生菌，革兰阳性，菌体粗大，具有4~8根周毛性鞭毛、运动迟缓，没有荚膜，芽孢卵圆形、近端位、芽孢比繁殖体宽。肉毒梭菌产生的肉毒毒素本质是蛋白质，为神经毒素，共产生六种毒素:A、B、C、D、E、F，其中的A、B、E、F与人类的食物中毒有关。
肉毒毒素毒性剧烈，少量毒素即可产生症状甚至致死，对人的致死量为0.1μg。
毒素摄入后经肠道吸收进入血液循环，输送到外围神经，毒素与神经有强的亲和力，阻止乙酰胆碱的释放，导致肌肉麻痹和神经功能不全。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：肉毒梭状芽孢杆菌荧光定量PCR试剂盒(探针法)，Clostridium botulinum qPCR Kit(Probe Method)
肉毒梭状芽孢杆菌广泛存在于自然界，是一种专性厌氧的腐生菌，革兰阳性，菌体粗大，具有4~8根周毛性鞭毛、运动迟缓，没有荚膜，芽孢卵圆形、近端位、芽孢比繁殖体宽。肉毒梭菌产生的肉毒毒素本质是蛋白质，为神经毒素，共产生六种毒素:A、B、C、D、E、F，其中的A、B、E、F与人类的食物中毒有关。
肉毒毒素毒性剧烈，少量毒素即可产生症状甚至致死，对人的致死量为0.1μg。
毒素摄入后经肠道吸收进入血液循环，输送到外围神经，毒素与神经有强的亲和力，阻止乙酰胆碱的释放，导致肌肉麻痹和神经功能不全。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 引物和探针经过优化，灵敏性高。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据肉毒梭状芽孢杆菌高度保守区设计，不会跟其他病原DNA发生交叉反应。
- 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
- 本产品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 500μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 肉毒梭状芽孢杆菌探针法qPCR引物混合液 | 100μL |
| 肉毒梭状芽孢杆菌qPCR探针 | 50μL |
| 肉毒梭状芽孢杆菌探针法qPCR阳性对照(1×108拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(用第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管曲线样品管
(2～7管)2×Probe qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 肉毒梭状芽孢杆菌qPCR探针 1μL 1μL 各1μL 肉毒梭状芽孢杆菌探针法qPCR
引物混合液2μL 2μL 各2μL N+2个待测DNA模板 7μL - - 超纯水 - 7μL - 第7步所得标准曲线样品稀释液 - - 各7μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间 预变性 95℃ 3min PCR反应
(40个循环)95℃ 15sec 60℃ 1min(采集FAM通道的荧光信号)
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。若重复结果Ct值小于40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。
相关搜索：肉毒梭状芽孢杆菌荧光定量PCR试剂盒(探针法)，Clostridium botulinum qPCR Kit(Probe Method)