产品货号：
BTN14-57100
中文名称：
沃尔巴克氏菌荧光定量PCR试剂盒(染料法)
英文名称：
Wolbachia spp. qPCR Kit(SYBR)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测沃尔巴克氏菌的试剂盒。
沃尔巴克氏菌(Wolbachia spp.)为革兰氏阴性菌，又称为沃尔巴克氏体，属于变形菌纲Proteobacteria的α亚门，立克次氏体科乌巴克体族乌巴克体属中的一种，1924年由Hertig和Wolbach在尖音库蚊Culexpipiens的生殖组织里首次被发现。沃尔巴克氏菌是自然界分布最为广泛的一种共生菌，在鞘翅目、双翅目、半翅目、同翅目、膜翅目、鳞翅目、直翅目和啮目等10多个目的150万一500万种昆虫中都有共生。沃尔巴克氏菌感染昆虫和其它节肢动物后，会导致昆虫和其他节肢动物无法产生雄性后代。21世纪初，对沃尔巴克氏菌的研究成为热点。科学家们在积极寻找控制沃尔巴克氏菌的新方法或开发消灭沃尔巴克氏菌的新药物，原因在于一旦控制或消灭沃尔巴克氏菌则有可能消除或抑制病原性宿主对人类、禽畜和作物造成的伤害。因此快速检测沃尔巴克氏菌具有重要意义。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
五、电泳检测
相关搜索：沃尔巴克氏菌荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Wolbachia spp. qPCR Kit(SYBR)
沃尔巴克氏菌(Wolbachia spp.)为革兰氏阴性菌，又称为沃尔巴克氏体，属于变形菌纲Proteobacteria的α亚门，立克次氏体科乌巴克体族乌巴克体属中的一种，1924年由Hertig和Wolbach在尖音库蚊Culexpipiens的生殖组织里首次被发现。沃尔巴克氏菌是自然界分布最为广泛的一种共生菌，在鞘翅目、双翅目、半翅目、同翅目、膜翅目、鳞翅目、直翅目和啮目等10多个目的150万一500万种昆虫中都有共生。沃尔巴克氏菌感染昆虫和其它节肢动物后，会导致昆虫和其他节肢动物无法产生雄性后代。21世纪初，对沃尔巴克氏菌的研究成为热点。科学家们在积极寻找控制沃尔巴克氏菌的新方法或开发消灭沃尔巴克氏菌的新药物，原因在于一旦控制或消灭沃尔巴克氏菌则有可能消除或抑制病原性宿主对人类、禽畜和作物造成的伤害。因此快速检测沃尔巴克氏菌具有重要意义。
- 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
- 特异性高，引物是根据人沃尔巴克氏菌高度保守区设计，不会扩增其他细菌和微生物。
- 引物和扩增体系经过优化，灵敏性比常规PCR高100倍。
- 提供无传染性的PCR阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 一管式操作，荧光PCR检测，不容易产生环境污染。
- 本产品只能用于科研，本试剂盒足够50次20μL体系的PCR。
| 组分 | 规格 |
| 2×qPCR MagicMix | 0.5mL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 沃尔巴克氏菌PCR引物 | 100μL |
| 沃尔巴克氏菌阳性对照(1×108拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的标准曲线样品的第4号(浓度为1×104拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×105拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌DNA提取试剂盒或柱式细菌DNA提取试剂盒。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的DNA释放剂，其使用手册可从本公司网站www.bjbalb.com通过搜索产品名称DNA释放剂或产品编号130982下载。
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。如果做2-3
次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。 - 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
注：仅ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照，其他荧光PCR仪器(如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000和LightCycler480)不需要使用ROX，则用水替代。成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管曲线样品管
(2～7管)2×qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 沃尔巴克氏菌PCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL 自备10×ROX(见注) 2μL 2μL 各2μL 待测样品DNA模板 6μL 不加 不加 第7步所得标准曲线样品稀释液(2～7号) 不加 不加 各6μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。
过程 温度 时间 预变性 94℃ 5min PCR反应
(35个循环)94℃ 0.5min 50℃ 0.5min(采集SYBR通道的荧光信号) 72℃ 0.5min 最后延伸 72℃ 10min
四、数据处理
- 以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
五、电泳检测
- 如果有必要电泳确认，可取10～20μL PCR产物直接在琼脂糖凝胶上电泳产物的大小为400bp。
相关搜索：沃尔巴克氏菌荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Wolbachia spp. qPCR Kit(SYBR)