产品货号：
BTN14-5140
中文名称：
草莓黄单胞菌荧光定量PCR试剂盒(染料法)
英文名称：
Xanthomonas fragariae SYBR qPCR Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒专门针对检测草莓黄单胞菌开发的PCR试剂盒。
草莓角斑病是草莓生产上危害严重的细菌性病害，其病原菌是草莓角斑病菌(Xanthomonas fragariae)，属于薄壁菌门(Gracilicutes)假单胞菌科(Pseudomonaceae)黄单胞菌属。草莓角斑病是草莓生产上危害极其严重的细菌病害。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～106拷贝/μL这5个10倍稀释度为例)
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。
二、样品DNA的制备
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：草莓黄单胞菌荧光定量PCR试剂盒(染料法)，草莓黄单胞菌染料法荧光定量PCR试剂盒，Xanthomonas fragariae SYBR qPCR Kit
草莓角斑病是草莓生产上危害严重的细菌性病害，其病原菌是草莓角斑病菌(Xanthomonas fragariae)，属于薄壁菌门(Gracilicutes)假单胞菌科(Pseudomonaceae)黄单胞菌属。草莓角斑病是草莓生产上危害极其严重的细菌病害。
- 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
- 引物根据草莓黄单胞菌设计，特异性高。
- 荧光定量PCR检测，比常规PCR更加灵敏，可达到60拷贝/反应。
- 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
- 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
- 本产品只适用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 2×qPCR MagicMix | 500μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 草莓黄单胞菌PCR引物混合液 | 100μL |
| 草莓黄单胞菌PCR阳性对照(1×107拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～106拷贝/μL这5个10倍稀释度为例)
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。
- 标记5个离心管，分别为6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在4号管中加入5μL 1×105拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×104拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到5个稀释度的标准曲线样品，放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是样品制备PC(样品制备阳性对照)，一个是样品制备NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为样品制备PC。另外用水作为样品制备NC。
- 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，5个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(用试剂盒提供的阳性对照的10000倍稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管曲线样品管
(1～6管)2×qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 草莓黄单胞菌PCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL N+2个待测DNA模板 6μL 不加 不加 超纯水 不加 6μL 不加 第6步所得标准曲线样品稀释液(2～6号) 不加 不加 各6μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间 预变性 94℃ 5min PCR反应
(40个循环)94℃ 1min 65℃ 1min(采集SYBR通道的荧光信号) 72℃ 1min 按仪器预设程序进行熔解曲线分析
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品cDNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于36。
阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于33。对待测样品，如果其Ct大于或等于36则为阴性，如果小于或等于33则为阳性。如果在33-36
之间，可结合熔解曲线判断，若样品的熔解温度与阳性对照相同，该样本判断为阳性，否则为阴性。结果如下图所示：
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