产品货号：
BTN14-24600
中文名称：
生孢梭菌荧光定量PCR试剂盒(染料法)
英文名称：
Clostridium sporogenes qPCR Kit(SYBR)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒是基于qPCR技术开发的生孢梭菌快速定量试剂盒。
生孢梭菌(Clostridium sporogenes)又名产孢梭菌，能够产生孢子，为革兰氏染色阳性菌。此菌以周生鞭毛运动，严格厌氧能分解蛋白质和糖类，能发酵葡萄糖和麦芽糖，产生丁酸和少量乙酸等，多存在于土壤、伤口和肠道内。在人体内，此菌只能在实体肿瘤中生长，不能在其他组织中(富氧因此具有潜在的医疗价值。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释PCR阳性对照(以102～107这6个10倍稀释度为例)。
二、样品DNA的制备
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：生孢梭菌荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Clostridium sporogenes qPCR Kit(SYBR)
生孢梭菌(Clostridium sporogenes)又名产孢梭菌，能够产生孢子，为革兰氏染色阳性菌。此菌以周生鞭毛运动，严格厌氧能分解蛋白质和糖类，能发酵葡萄糖和麦芽糖，产生丁酸和少量乙酸等，多存在于土壤、伤口和肠道内。在人体内，此菌只能在实体肿瘤中生长，不能在其他组织中(富氧因此具有潜在的医疗价值。
- 根据生孢梭菌的保守序列设计的专一性引物，与相关细菌无交叉反应。
- 灵敏度比常规PCR高2 3个数量级，可以达到几百拷贝反应。
- 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
- 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
- 本试剂盒足够5 0次20μL反应体系的荧光定量PCR。
- 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
| 组分 | 规格 |
| 2×qPCR MagicMix | 500μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 生孢梭菌PCR引物混合物 | 100μL |
| 生孢梭菌PCR阳性对照(1×108 copy/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释PCR阳性对照(以102～107这6个10倍稀释度为例)。
- 注意事项：本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无污染的DNA片段作为阳性对照。由于阳性对照浓度非常高，因此下列操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染待处理样品或本试剂盒的其他成分。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液(最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，从6号管中取5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的阳性对照梯度稀释液中的第4号(浓度为1×104 copy/μL，10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×105 copy/μL，10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水(总体积跟处理样品一样，处理阳性体积多少取决于所用试剂盒的要求)作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一柱式细菌DNA提取试剂盒。本试剂盒免费赠送不需要DNA提取操作的DNA释放剂试用装，其使用手册可以在本公司网站输入DNA释放剂或产品编号130982后下载。
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照)。如果做2～3次重复，则反应设置数量相应增加。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
注：仅ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照，其他荧光PCR仪器(如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000和LightCycler480)不需要使用ROX。成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照PCR阳性对照
(2～7管)2×qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 生孢梭菌PCR引物混合物 2μL 2μL 各2μL 自备10×ROX(见注) 2μL 2μL 各2μL 样品制备所得DNA模板(来自于第8步) 6μL 不加 不加 稀释所得6个阳性对照(来自于第6步) 不加 不加 各6μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。
过程 温度 时间 预变性 95℃ 3分钟 PCR反应
(40个循环)95℃ 15秒 60℃ 60秒(数据采集)溶解曲线分析 - 数据采集在60℃保温步骤用SYBR通道进行荧光数据采集，PCR结束后再进行溶解曲线分析以排除引物二聚体，具体设计按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。
四、数据处理
- 如果PCR阳性对照和PCR阴性对照均得到预期阳性和阴性结果，则说明PCR有效，可以进行后续分析。以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果PCR阳性对照或PCR阴性对照任何一个没有得到预期阳性和阴性结果(如PCR阳性对照没有扩增，或阴性对照出现扩增)，则说明PCR实验无效或污染，不需要进行后续分析，需要重复PCR或请跟厂家联系。
- 如果样品制备阳性对照或样品制备阴性对照均得到预期阳性和阴性结果，说明样品制备操作有效，实验结果有效。
- 如果样品制备阳性对照或样品制备阴性对照任何一个没有得到预期结果(如样品制备阳性对照无扩增，或样品制备阴性对照有扩增)，说明样品制备操作无效或有污染，实验结果无效，需要重复样品制备过程或请跟厂家联系。
相关搜索：生孢梭菌荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Clostridium sporogenes qPCR Kit(SYBR)