产品货号：
YTC0824
中文名称：
3D培养坏死细胞核染色液(PI)
英文名称：
By3D PI Staining Solution
产品规格：
10mL|50mL|200mL
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本制品是一种快速、便捷的用于3D培养的细胞球或类器官等坏死细胞的细胞核染色的溶液。仅需染色10分钟就可在荧光显微镜下观察到坏死细胞中非常明亮的细胞核红色荧光染色。
碘化丙啶(PI)是一种核酸红色荧光染料，它不能穿透活细胞的细胞膜，只能染色细胞膜完整性丧失的坏死细胞，并与核酸结合发出明亮的红色荧光，常用于坏死细胞包括凋亡晚期丧失细胞膜完整性的继发性坏死细胞的检测。
- 适用范围广：本制品可用于常规方法培养出的3D细胞球或类器官，包括超低吸附细胞培养板、Matrigel包被的平板、琼脂糖包被的平板、细胞悬滴培养板等。
- 使用便捷：整个检测过程仅需约10～30分钟即可完成。3D细胞球经凋亡、坏死等诱导处理后，仅需加入本制品避光孵育10分钟即可进行荧光检测。
| 组分 | 10mL | 50mL | 200mL |
| 3D培养坏死细胞核染色液(PI) | 10mL | 50mL | 200mL |
| 说明书 | 1份 | ||
保存：-20℃，避光，有效期1年。
- 本制品反复冻融可能会降低染色效果，为保证最佳使用效果，请尽量避免反复冻融，第一次解冻后可以适当分装保存。
- 细胞球在外力的作用下容易变形或分散，PBS洗涤及换液等过程须轻缓，避免破坏或吹散3D细胞球。
- 不同种类的细胞球对凋亡或坏死诱导剂的耐受可能存在一定的差别，3D细胞球经凋亡或坏死诱导后，形态可能会发生一些变化，在染色前可以镜下观察细胞球的形态，可以酌情考虑是否选择形态比较完整的细胞球进行染色分析。
- 本制品浓度经过优化，确保可以满足坏死细胞染色及各种常规染色的需要。如需使用特定浓度的PI，请选购碘化丙啶。
- 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
- PI对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。
本步骤以96孔板，每孔接种100μL细胞为例，如使用其它类型的多孔板，各试剂使用量请按照相应比例进行换算。
- 3D细胞的准备：在96孔3D培养板中每孔接种100μL细胞，细胞的接种量根据具体的实验方案，例如培养天数、需要的3D细胞球状体的大小等确定，按照3D细胞培养方案培养细胞，并按照实验设计进行一定的处理。96孔3D培养板推荐使用3D细胞培养板包被液、3D细胞培养包被试剂盒包被的U形底96孔板，或直接使用GoldBalb超低吸附96孔板(YTC4962或YTC4961)、超低吸附黑色透明底96孔板等。
- 为达到最佳的染色效果，具体的细胞球培养时间、药物等干预时间可以根据细胞种类、具体的实验需求等进行调整。例如，对于HCT-116细胞，通常接种培养48小时形成较为紧实的细胞球后进行干预和染色效果较好。
- 3D细胞固定(选做)：小心去除孔内培养液，每孔加入100μL免疫染色固定液，室温固定细胞10分钟。
- 通常不进行固定也能获得良好的染色效果。为达到最佳的使用效果，具体的固定时间可以根据细胞种类、培养天数、细胞球状体大小等进行调整。
- 3D细胞球通常位于在培养板或培养皿等培养器皿的底部，培养板在对着光线时能看到孔内针尖大小的乳白色细胞球，吸除孔内液体时须尽量避开细胞球以免将细胞球吸走。可以根据孔内液体的体积将移液器调至合适的量程，例如需要吸除的液体体积为100μL，将200μL移液器的量程调整到50～70μL，避开细胞球从液体边缘缓慢、分次吸除。孔内加入液体时，沿着孔壁小心、缓慢加入，避免破坏或吹散3D细胞球。
- 3D细胞PI染色：
- 如果进行了细胞固定，小心去除免疫染色固定液；对于活细胞染色，小心去除原有细胞培养液。
- 3D细胞球通常位于在培养板或培养皿等培养器皿的底部，培养板在对着光线时能看到孔内针尖大小的乳白色细胞球，吸除孔内液体时须尽量避开细胞球以免将细胞球吸走。可以根据孔内液体的体积将移液器调至合适的量程，例如需要吸除的液体体积为100μL，将200μL移液器的量程调整到50～70μL，避开细胞球从液体边缘缓慢、分次吸除。孔内加入液体时，沿着孔壁小心、缓慢加入，避免破坏或吹散3D细胞球。
- 每孔加入100μL By3D PI染色液，对于活细胞，在适宜于细胞培养的温度避光孵育10分钟；对于固定的细胞，可以室温避光孵育10分钟。
- 为达到最佳的染色效果，具体染色时间可以根据细胞种类、培养天数、细胞球状大小等进行调整。
- 如果进行了细胞固定，小心去除免疫染色固定液；对于活细胞染色，小心去除原有细胞培养液。
- 荧光照片拍摄：染色结束后，可以无须洗涤，即可在荧光显微镜下观察。染色结束后，加入适量的PBS小心洗涤细胞1～2次，染色效果更佳。
图1.本制品对于3D培养的HCT-116细胞的染色效果图。5000个HCT-116细胞在使用3D细胞培养包被试剂盒包被的U形底96孔板中培养48小时，不同浓度Camptothecin诱导细胞球坏死过夜，然后吸除培养液后未经固定处理直接加入By3D PI染色液染色10分钟。结果显示，By3D PI染色液对于药物诱导坏死的3D细胞染色效果清晰、明亮，且3D细胞球内部的坏死更严重一些，同时无药物处理组无明显PI荧光染色。实际检测效果会因细胞株、实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。
传统的细胞培养大多以二维(2D)的形式展开，但2D培养的细胞在生长方式、生长形态、分化和功能等方面都与体内生理条件下细胞的真实形态和结构存在明显差异，可能会因为细胞结构和组织形态的缺失，使实验结果的可信度降低。三维(3D)细胞培养能够更好地模拟体内细胞生存的微环境，更能代表体内组织，也能更真实的反应细胞与细胞间、细胞与基质间的相互作用，细胞对外源性和内源性刺激的应答也更接近于它们在体内的反应，3D细胞培养从而成为更有价值并更为可信的体外实验模型，能够获得与体内实验更加一致的实验结果。
相关搜索：3D培养坏死细胞核染色液(PI)，PI染色液，坏死细胞核染色，三维培养细胞核染色，碘化丙啶染色液，By3D PI Staining Solution