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本制品是一种以细胞核绿色荧光染料BalbAIE Nuclear Green Probe为荧光探针、进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。本试剂盒与传统的使用碘化丙啶(PI)的细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒相比，检测灵敏度更高，检测结果更加稳定可靠。

BalbAIE Nuclear Green Probe是一种新型的双链DNA的荧光染料。BalbAIE Nuclear Green Probe和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被BalbAIE Nuclear Green Probe染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。

BalbAIE Nuclear Green Probe染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1～2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞BalbAIE Nuclear Green Probe染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。

本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。

细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。

• 本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
  
• 需自备PBS和70%乙醇，PBS可以向百奥莱博订购。
  
• 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

• 细胞样品的准备：
  
  • 对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3～5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μL左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1mL冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5mL离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μL左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
    
  • 对于悬浮细胞：1000×g左右离心3～5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μL左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1mL冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5mL离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μL左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
• 细胞固定：加入1mL冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃固定30分钟或更长时间。通常固定2小时或以上更能保证染色效果，固定12～24小时可能效果更佳。1000×g左右离心3～5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μL左右的70%乙醇，以避免吸走细胞。加入约1mL冰浴预冷的PBS，重悬细胞。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μL左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
  
• BalbAIE Nuclear Green Staining Solution的配制：
  参考下表，根据待检测样品的数量配制适量的BalbAIE Nuclear Green Staining Solution：
  

  样品数量	1	6	12
  Staining Buffer	0.5mL	3mL	6mL
  BalbAIE Nuclear Green Probe(1000×)	0.5μL	3μL	6μL
  RNase A(50×)	10μL	60μL	120μL
  BalbAIE Nuclear Green Staining Solution	~0.5mL	~3mL	~6mL

  配制好的BalbAIE Nuclear Green Staining Solution短时间内可以4℃保存，宜当日使用。
  
  
• 染色：每管细胞样品中加入0.5mL BalbAIE Nuclear Green Staining Solution，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴30分钟。随后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小时内完成流式检测，最好能在当日完成流式检测。
  
• 流式检测和分析：BalbAIE Nuclear Green Probe为绿色荧光，激发波长范围为380～470nm，发射波长范围为500～600nm。推荐使用流式细胞仪BV510 (Ex/Em=405/525nm)通道进行检测，也可以使用FITC (Ex/Em=488/525nm)通道进行检测，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。
  
  BV510通道也称为KO525、Krome Orange、AmCyan、V500等通道。