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碘化丙啶(Propidium，简称PI)是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。

碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1～2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。

细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。

• 本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
  
• 需自备PBS和70%乙醇，PBS(货号：YTB1103)可以向百奥莱博订购。
  
• 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
  
• 碘化丙啶对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。

• 细胞样品的准备：
  
  • 对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000g左右离心3～5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μL左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1mL冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5mL离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μL左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
    
  • 对于悬浮细胞：1000g左右离心3～5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μL左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1mL冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5mL离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μL左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
• 细胞固定：加入1mL冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃固定30分钟或更长时间。通常固定2小时或以上更能保证染色效果，固定12～24小时可能效果更佳。1000g左右离心3～5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μL左右的70%乙醇，以避免吸走细胞。加入约1mL冰浴预冷的PBS，重悬细胞。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μL左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
  
• 碘化丙啶染色液的配制：参考下表，根据待检测样品的数量配制适量的碘化丙啶染色液：
  

  成分	1个样品	6个样品	12个样品
  染色缓冲液	0.5mL	3mL	6mL
  碘化丙啶染色液(20X)	25μL	150μL	300μL
  RNase A(50X)	10μL	60μL	120μL
  总体积	0.535mL	3.21mL	6.42mL

  
  注：配制好的碘化丙啶染色液短时间内可以4℃保存，宜当日使用。
  
• 染色：每管细胞样品中加入0.5mL碘化丙啶染色液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴30分钟。随后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小时内完成流式检测，最好能在当日完成流式检测。
  
• 流式检测和分析：用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞
  DNA含量分析和光散射分析。