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本产品是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测等。

本试剂盒检测非常便捷。无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。

酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。WST-1对细胞无明显毒性。加入WST-1显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到最佳测定时间。

WST-1是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(参考下图)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。

图1．WST-1检测原理图(EC=electron coupling reagent，即电子耦合试剂)


WST-1是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-1和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-1产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-1比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-1和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高(参考下图)。

图2．WST-1、XTT和MTT的检测效果比较。450nm为测定波长，690nm为参考波长

组分	100次	500次	2500次
WST-1(粉末)	1支	1瓶	1瓶
电子耦合试剂	1mL	5mL	25mL

保存：-20℃避光，有效期一年。WST-1粉末溶解后，4℃避光可以保存一周，-20℃避光可以保存半年(宜适当分装，尽量避免反复冻融)。



由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。

• WST-1溶液的配制：把25mL电子耦合试剂加入到WST-1粉末中，完全溶解即成WST-1溶液。WST-1溶液4℃避光可保存一周，而不影响使用效果。短期内不使用的WST-1溶液，分装后可以-20℃避光保存半年(尽量避免反复冻融)。冻存的WST-1溶液溶解后可能会观察到一些沉淀物，这是正常现象，37℃水浴孵育2～10分钟，通常可以完全溶解。
  
• 通常细胞增殖实验每孔加入100μL 2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100μL 5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要，进行培养并给予0～10μL特定的药物刺激。
  
• 每孔加入10μL WST-1溶液。如果起始的培养体积为200μL，则需加入20μL WST-1溶液，其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和WST-1溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。
  
• 在细胞培养箱内继续孵育0.5～4小时，对于大多数情况，孵育1～2小时就可以了。时间长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。图3为HT-1080细胞在不同时间测定的细胞数量曲线。
  
  图3．HT-1080细胞培养20小时后，加入WST-1溶液后不同时间测得的吸光度。
  
• 把96孔板置于摇床上摇动一分钟，以充分混匀待检测体系。
  
• 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片，可以使用420～480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长作为参考波长进行双波长测定。

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