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MTT是一种黄色染料，已经普遍替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法，用来检测细胞的活力，细胞增殖以及细胞毒性分析。检测原理在于：MTT是一种可接受氢离子的化合物染料，带正电荷，具有细胞膜渗透性。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT还原成为水不溶性的深蓝色MTT-甲臜结晶，而死细胞不具有此功能。甲臜结晶是不能穿透细胞膜，因此沉积在处于增殖且未受损伤的细胞内。甲臜结晶可用DMSO或者酸化的异丙醇溶解出来，酶标仪下测定570nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量与活细胞数目成正比，用以评估细胞存活状况。

MTT也可用作免疫组化/细胞化学染色试剂，也可用来检测NAD。MTT被快速还原成甲臜后，能够螯合镍，铜和钴。钴螯合物可参与机体氧化系统。

中文别名	溴化噻唑蓝四氮唑；3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑噻唑蓝；
英文别名	3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium Bromide;Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide;Thiazoyl blue tetrazolium bromide;
CAS号	298-93-1
分子式	C18H16N5SBr
外观	淡黄色至橙色粉末
分子量	414.3
纯度	≥98%
熔点	187℃
溶解性	溶于水，甲醇
结构式

• 溶解甲臜的有机溶剂具有毒性，使用时注意防护。
  
• MTT有致癌性，应小心操作；MTT溶液需要无菌，因其对菌很敏感。MTT溶液不可4℃保存超过1周，因其可能发生降解，导致检测结果错误。
  
• MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度最好在0～0.7范围内。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本制品仅作科研用途！

• 工作液配制
  
  • MTT溶液
    生化研究中，常配制成5mg/mL的储备液。MTT最好现配现用，可以称取MTT 0.5g，溶于100mL的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，4℃避光短时间保存。建议小剂量分装放到-20℃长期保存，避免反复冻融。
    
  • SDS-HCl溶液(MTT终止液)
    取10mL 0.01M HCl加入1g SDS，颠倒混匀或者超声使其完全溶解，此时即为终止液。建议现配现用。
• MTT细胞增殖检测
  
  • 接种细胞：用含10%胎牛血清(FBS)的培养液配制成单个细胞悬液，调整细胞密度，以每孔5000-10,000个细胞接种到96孔板，每孔体积100μL，培养板的边缘孔用无菌PBS填充。设置空白对照孔(不含有细胞)。
    
  • 37℃，5% CO₂，培养24-72h。
    
  • 可选：对于贴壁细胞，去除旧的培养液，更换100μL/孔新鲜的培养液(不含酚红)；对于悬浮细胞，离心96孔板，去除尽可能多的上清液。然后加入100μL/孔新鲜的培养液(不含酚红)重悬细胞；
    
  • 每孔加入10μL MTT溶液(5mg/mL)，加样时尽量勤换枪头，控制加量误差。
    
  • 水平摇床上低速混匀1min后，放入37℃培养箱孵育4h。
    注：对于高密度的细胞(>100,000 cells/孔)可缩短孵育时间至2h。
    
  • 对于贴壁细胞，直接吸掉旧的培养液，避免枪尖刮破单细胞层。对于悬浮细胞，离心收集细胞，去除培养液。
    
  • 加入100μL/孔SDS-HCl溶液，用枪充分混匀后放入37℃培养箱孵育4h。
    注：更长的孵育时间会降低检测灵敏度。
    
  • 孵育结束，放置在酶标仪上摇匀后，选择570nm，测定吸光度。记录结果，比色以空白调零。
    注：对于细胞毒性检测，以未经药物处理细胞的OD值为100%，然后计算药物处理细胞所占的比率(x)，公式如下：OD(未处理细胞)/OD(药物处理细胞)=100%/x。然后建立直方图。