产品货号：
SY0488
中文名称：
JC-1荧光探针
英文名称：
产品规格：
1mg|5mg
发货周期：
1～3天
产品价格：
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JC-1用于检测细胞的线粒体膜电位时常用的浓度范围为1～20μg/mL，对于很多细胞适宜采用的JC-1浓度为10μg/mL。
JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电△Ψm位的理想荧光探针。JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内，JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光(Ex=585nm,Em=590nm)；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光(Ex=514nm,Em=529nm)。JC-1不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。观察时，只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。
保存：-20℃干燥避光保存，溶液避免反复冻融，有效期1年。
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JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电△Ψm位的理想荧光探针。JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内，JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光(Ex=585nm,Em=590nm)；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光(Ex=514nm,Em=529nm)。JC-1不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。观察时，只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。
| 化学名称 | 5,5‘,6,6’-Tetrachloro-1,1‘,3,3’-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide |
| CAS号 | 3520-43-2 |
| 分子式 | C25H27Cl4IN4 |
| 分子量 | 652.23 |
| 纯度 | ＞95%(HPLC) |
| 外观 | 红褐色粉末 |
| 溶解性 | 溶于DMSO和DMF，不溶于水 |
| 荧光光谱 | 单体形式(monomer form)：Ex/Em=514nm/529nm 聚合物形式(J-aggregate form)：Ex/Em=585nm/590nm |
| 结构式 |  |
| 组分 | 1mg | 5mg |
| JC-1荧光探针溶液(5mg|mL) | 1mg | - |
| JC-1荧光探针粉末 | - | 5mg |
保存：-20℃干燥避光保存，溶液避免反复冻融，有效期1年。
- JC-1是光敏感性的，所有染色步骤的操作过程中避免强光接触。
- JC-1染色完成后，立即进行后续的结果分析非常必要；
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 本制品仅作科研用途
- 工作液配制：
- JC-1粉末(5mg)：直接加1mL DMSO到粉末内，室温颠倒混匀使其充分溶解，即得到5mg/mL的储存液。溶液分装成小量储存于-20℃，避光干燥，避免反复冻融。
- JC-1储存液(1mg in DMSO)：本品是JC-1的DMSO储存液，浓度为5mg/mL。使用者需要根据单次用量来分装，-20℃避光干燥，避免反复冻融。
- 工作液配制：将冻存的储存液置于室温充分融化，之后用缓冲液或者预热的培养基直接稀释储存液(5mg/mL)到需要的工作液浓度，边震荡边稀释，充分混匀。为了去除任何不溶颗粒，建议13000×g离心JC-1工作液1min，小心吸取上清转移到新的管子内。整个过程要避光操作。注意：因JC-1不溶于水，很可能在稀释到工作液的过程中形成聚集颗粒，则建议细胞染色前用离心或者过滤的方法去除这些颗粒后再使用。
- JC-1粉末(5mg)：直接加1mL DMSO到粉末内，室温颠倒混匀使其充分溶解，即得到5mg/mL的储存液。溶液分装成小量储存于-20℃，避光干燥，避免反复冻融。
- JC-1染色步骤(流式细胞仪)
- 于6、12或24-孔板上进行细胞铺板，密度为5×105 cells/mL。37℃，5%CO2培养箱培养过夜。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。注：进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过1×106 cells/mL，也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。
- 取0.5mL细胞悬液至无菌的离心管内。
- 室温条件400×g离心5min；吸掉上清。
- 用0.5mL JC-1工作液重悬细胞，于37℃，5%CO2培养箱孵育15～30min。
注意：一般情况，15min足以进行充分的染色。 - 室温条件400×g离心5min；吸掉上清。
- 用2mL细胞培养液或者缓冲液重悬细胞，之后室温条件400×g离心5min；吸掉上清。
- 重复步骤6。
- 用0.5mL新鲜培养液或者缓冲液重悬细胞，即可进行后续的流式分析。
注意：请马上进行流式定量分析，此细节很重要。 - 数据分析：含有红色JC-1聚集物的健康细胞线粒体用FL2通道检测；含有绿色JC-1单体的凋亡或不健康细胞用FL1(FITC)通道检测。
- 于6、12或24-孔板上进行细胞铺板，密度为5×105 cells/mL。37℃，5%CO2培养箱培养过夜。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。注：进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过1×106 cells/mL，也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。
- JC-1染色步骤(荧光显微镜)
- 悬浮细胞
- 同上JC-1染色步骤(流式细胞仪)1～6。
- 用0.3mL的缓冲液重悬细胞，即可进行荧光显微镜检测。
注意：请马上进行荧光显微分析，此细节重要。 - 数据分析：使用可同时检测荧光素fluorescein/罗丹明或者荧光素fluorescein/Texas Red的双带带通滤波器进行检测。未凋亡的活细胞因JC-1聚集后线粒体呈红色，最大发射波长为590nm。凋亡和坏死细胞染料一直以单体形式存在，线粒体呈现绿色。最大发射波长为530nm。
- 同上JC-1染色步骤(流式细胞仪)1～6。
- 贴壁细胞
- 培养皿内用盖玻片进行细胞爬片或者细胞培养在腔室玻片(chamber slide)上。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。
- 染色前开始配制JC-1工作液，配制步骤见上。
- 吸掉细胞培养液，然后加入足够覆盖所有细胞的JC-1工作液。于37℃，5% CO2培养箱孵育15～30min。
注意：一般情况，15min足以进行充分的染色。 - 吸掉培养液，然后用合适的缓冲液来清洗细胞2次。
- 加入2mL细胞培养液(培养液可含有血清和酚红)或者PBS缓冲液，于荧光显微镜或者共聚焦显微镜下观察。
- 数据分析：同悬浮细胞。
- 培养皿内用盖玻片进行细胞爬片或者细胞培养在腔室玻片(chamber slide)上。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。
- 悬浮细胞
- JC-1染色步骤(荧光酶标仪)
- 同上JC-1染色步骤(流式细胞仪)1～7；
- 用300μL缓冲液重悬细胞；然后按照每孔100μL的量将染色好的细胞转移到黑色的96孔板内，即可进行荧光酶标板分析。
注意：请马上进行荧光显微分析，此细节重要。 - 数据分析：健康细胞内，JC-1单体聚集形成聚合物，线粒体呈现强烈的红色荧光(激发波长550nm，发射波长600nm)。凋亡或坏死细胞内JC-1以单体形式存在，线粒体呈强烈的绿色荧光(激发波长485nm，发射波长535nm)。然后计算红色荧光信号与绿色荧光信号的比值，用来判断细胞健康程度。
- 同上JC-1染色步骤(流式细胞仪)1～7；
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