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CCK-8试剂盒是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。CCK-8法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

WST-8属于MTT的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。

• CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较：
  

  检测方法	MTT法	XTT法	WST-1法	CCK-8法
  甲臜产物的水溶性	差(需加有机溶剂溶解后再检测)	好	好	好
  产品性状	粉末	2瓶溶液	溶液	1瓶溶液
  使用方法	配成溶液后使用	现配现用	即开即用	即开即用
  检测灵敏度	高	很高	很高	高
  检测时间	较长	较短	较短	最短
  检测波长	560～600nm	420～480nm	420～480nm	430～490nm
  细胞毒性	高，细胞形态完全消失	很低，细胞形态不变	很低，细胞形态不变	很低，细胞形态不变
  试剂稳定性	一般	较差	一般	很好
  批量样品检测	可以	非常适合	非常适合	非常适合
  便捷程度	一般	便捷	便捷	非常便捷

• 酚红和血清对CCK-8法的检测不会造成干扰；
  
• 细胞毒性非常低，因此加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。

• 建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。
  
• 有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加入CCK-8试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数。
  
• 白细胞可能需要培养较长时间。
  
• 当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000个/孔(100μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100μL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
  
• 如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430～490nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。
  
• 培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 制作标准曲线(测定细胞具体数量)
  
  • 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞到培养板内。
    
  • 按比例(例如：1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3～5个细胞浓度梯度，每个浓度建议
    3～6个复孔。
    
  • 接种后培养2～4小时使细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴)，OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)
• 细胞活性检测
  
  • 在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃,5% CO₂)。
    
  • 向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。
    
  • 将培养板在培养箱内孵育1～4小时。
    
  • 用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
    
  • 若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。
• 细胞增殖-毒性检测
  
  • 在96孔板中配制100μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时(37℃，5% CO₂)。
    
  • 向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。
    
  • 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如：6、12、24或48小时)。
    
  • 向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。
    
  • 将培养板在培养箱内孵育1～4小时。
    
  • 用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
    
  • 若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。
    注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基)，去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。