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ATP生物发光技术的原理是荧光素酶以荧光素、三磷酸腺苷(ATP)和O2为底物，在Mg²⁺存在时，能将化学能转化为光能。ATP既是荧光素酶催化发光的必需底物，又是所有生物生命活动的能量来源。在荧光素酶催化的发光反应中，ATP在一定的浓度范围内，其浓度与发光强度呈线性关系。

本试剂盒采用生物发光(bioluminescent)法，利用Firefly luciferase(萤火虫荧光素酶)催化底物——荧光素的转化，高效利用ATP的能量，发射出光子。发光信号与存在的ATP量呈正比，而ATP与存在于培养基中的细胞数目直接呈正比。

本试剂盒为多孔板而设计，是进行自动化高通量筛选(HTS)，细胞增殖和毒性分析的理想选择。均质检测步骤就是将单一试剂直接加入含有血清的培养细胞中，无需洗涤细胞、去除培养基或进行多步加样操作。

均质检测的"加样-混合-检测"的操作方案使得细胞裂解和产生的发光信号与存在的ATP量成正比，而ATP量直接与培养物中的细胞数量成正比。独特的均质检测方案避免了那些需要多个步骤的ATP检测方法可能会引入的误差。

• 简化了细胞活性检测步骤：均质的"加样-混合-检测"方案减少了其它同类检测所需的操作步骤。
  
• 细胞用量更少：可准确地检测到低于常用的比色法和荧光法的检测低限的细胞数。减少了每个检测反应所需的细胞数。
  
• 迅速获得结果：加入试剂后10分钟就能获得数据。
  
• 可自行选择检测方案：可用于多种类型的多孔板操作。可用发光检测仪或CCD成像设备记录数据。
  
• 可连续处理培养板：发光信号稳定，样品可进行批量处理。

• 荧光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前细胞和检测试剂均需平衡至室温后再进行测定。请勿室温存放。
  
• 检测试剂请混匀后使用。
  
• 本试剂盒的检测试剂中含有荧光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。为取得良好的使用效果，第一次解冻后可适当分装保存，但需注意分装的容器不能有ATP污染。
  
• 待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰荧光素酶反应，从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。
  
• 检测时须使用适合于细胞培养的白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。
  
• 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，
  不得存放于普通住宅内。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 细胞的准备：
  使用适合进行化学发光检测的96孔板，每孔接种100μL细胞(如使用384孔板，每孔接种25μL细胞，具体用量视不同类型的384孔板而定)，并确保检测时每孔的细胞数量在5万个以内(如使用384孔板宜控制在1万个以内)，同时设置不含细胞的培养液孔作为阴性对照，按照细胞培养的常规方法培养细胞。如有需要，可加入药物处理细胞。此外，如有必要，也可以设置细胞的浓度梯度，以便后续确定试剂盒的使用效果。
  
• 检测试剂的准备：
  
  • 融解冻存的CellTiter-BalbCell发光法检测试剂，如有必要可适当分装该试剂。
    
  • 按照96孔板每孔100μL (384孔板每孔25μL)的量，取适量CellTiter-BalbCell发光法检测试剂，平衡至室温。
• 细胞活力检测：
  
  • 取出细胞培养板在室温平衡10分钟(通常不宜超过30分钟)。
    
  • 96孔板每孔加入100μL CellTiter-BalbCell发光法检测试剂(384孔板每孔25μL)。
    
  • 室温振荡2分钟，以促进细胞的裂解。
    
  • 室温(约25℃)孵育10分钟，使发光信号趋于稳定。
    
  • 使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数，每个孔的检测时间一般为0.25～1秒或更长时间，具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。
    
  • 根据化学发光读数直接计算细胞的相对活力，或根据ATP标准曲线计算出ATP的量从而计算出细胞的相对活力。
    注：检测效果因细胞的种类不同而有所不同，对于一些ATP含量特别高的细胞，在细胞数量达到50,000个后可能会不呈线性相关，但化学发光读数还是会继续升高。