产品货号:
KFS336
中文名称:
Ki67细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)
英文名称:
Ki67 cell proliferation Detection Kit
产品规格:
20T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
Ki67蛋白是细胞周期相关的一种核蛋白,主要表达于细胞增殖分裂的各个时期(G1、S、G2和M期),但是在静息的细胞(G0期)中不表达。Ki67常用于检测肿瘤细胞的生长指数(免疫组化法利用计算细胞总数中的Ki67阳性细胞数所占比例得到Ki67指数)。
Ki67通常通过标记抗Ki67的抗体(FITC绿色荧光)和DNA染料碘化丙啶(PI,红色)而利用流式细胞仪检测来实现对细胞周期的检测。
组分 | 规格 |
anti-Ki67 antibody(1μg/μL) | 25μL |
FITC-羊抗兔IgG(全分子) | 30μL |
保存:-20℃,避光,有效期1年。
- 仪器:微量移液器、低速离心机、平板摇床、微量移液器、流式细胞仪、1.5mL Micro-tube。
- 试剂:Tween-20、Triton X-100、BSA、0.05%胰蛋白酶-EDTA细胞消化液、乙醇。
- 要求用户自备的溶液及其配置:
- PBS/1% BSA洗涤液:0.1g BSA溶于10mL PBS,按实验用量配制所需要的体积量。
- 抗体孵育液0.5% Tween-20/1%BSA/PBS:0.05mL Tween-20,0.1g BSA溶于9.95mL PBS。
- PI染色母液(1mg/mL)
- RNase A
- PBS/1% BSA洗涤液:0.1g BSA溶于10mL PBS,按实验用量配制所需要的体积量。
- 所有的沉淀细胞步骤为2000rpm,5min。
- 可渗透化处理细胞后细胞浓度大约为106,样品可以4℃储存于乙醇中到2个星期。
- 流式细胞检测时需要设立对照试验:
① 只用PI染细胞
② 只用羊抗兔IgG-FITC染细胞
③ 未染色的细胞组
- 在最适的环境下培养细胞。
- 除去培养液,用PBS洗一次。
- 胰蛋白酶处理和收集细胞,离心,(注意1)保证每管细胞数在) 106个。
- 用0.3mL PBS轻轻的重悬细胞,然后慢慢加入0.7mL预冷的100%乙醇。用1mL玻璃移液管小心的混匀。在4℃至少1h。(注意2)
- 沉淀细胞,完全吸去上清。
- 用150μL PBS/1% BSA洗细胞2次。
- 用100μL抗体孵育液(0.5% Tween-20/1%BSA/PBS)重悬细胞,加入1μL Ki67抗体(1μg/106 cells),室温孵育1小时。
- 离心收集细胞,用150μL1% BSA-PBS洗2次。
- 离心收集细胞,用50μL抗体孵育液重悬,加1μL (1.5μg/106 cells)羊抗兔IgG-FITC,室温孵育30分钟。离心收集细胞,150μL PBS/1% BSA洗2次。
- 用含有终浓度为10μg/mL RNase A和20μg/mL PI的0.5mL PBS(pH7.4)重悬细胞。
- 避光使细胞在室温下孵育20min后,离心收集细胞,150μL PBS/1% BSA洗2次后,转移至流式检测管中重悬。
- FACS检测或者储存于4℃。(注意3)
相关搜索:Ki67细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法),细胞增殖检测试剂盒,Ki67 cell proliferation Detection Kit