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AlamarBlue细胞活力检测试剂盒提供了一种可靠、灵敏、安全和低成本的快速有效检测细胞活力与毒性的方法。AlamarBlue通过在细胞生长的培养基中所产生的化学还原反应，将非荧光信号的染料转换成为一红色荧光物质，试卤灵(9-羟基-3-异吩恶嗪酮7-羟基-3H-吩恶嗪-3-酮)，从而检测细胞的存活率。维持细胞生产需要还原性环境而抑制生长则表现为氧化型环境。细胞生长相关的还原性可表现为氧化还原指示剂从氧化型(非荧光素、紫色)转为还原型(荧光素、红色)。该荧光信号可以用530～560nm的激发波激发，在590nm处可以获发射波，检测570nm和600nm的的吸光度值，校正监测值，可以减去相应的570nm和600nm的背景吸光度值。检测所产生的荧光信号是与样品中的活细胞数成正比的。

AlamarBlue细胞活性检测试剂盒的灵敏度相似于[3H]胸苷法检测细胞增殖法。根据不同类型的细胞，AlamarBlue可以检测到至少40个细胞，同时保证很好的重现性和灵敏度。作为试卤灵(紫红、红色荧光)可以进一步被还原为水解化的试卤灵(无色、无荧光)，当细胞数量增多，所有的刃天青(7-羟基-3-羰基-10-氧化-三氢吩恶嗪)被转换为试卤灵(9-羟基-3-异吩恶嗪酮7-羟基-3H-吩恶嗪-3-酮)，试剂盒的信号反而会发生衰减。因此，对于您所用的试剂盒来说，针对不同的细胞类型，应该调整您的细胞数，做相应的优化，才能得到更好的结果。

1. 96孔细胞培养板每孔100μL培养基饲养细胞，控制细胞数目在40～10000个/贴壁细胞，2000～500000个/悬浮细胞。设置空培养基做对照。
   
2. 加入10μL AlamarBlue溶液至培养基中，37℃孵育：24小时(比色法读数)；5～6小时(荧光读数)。
   
3. 检测570nm和600nm的吸光度，或者用荧光微孔板读数530nm激发，590nm发射波读数。
   
4. 如果采用比色法检测，选择OD₅₇₀-OD₆₀₀检测，如果检测荧光信号，请在校正OD值后，先设置标准曲线，选择合适您实验的细胞最佳浓度。

1. 荧光读数法
   对于细胞增殖或细胞毒性的检测，待测化合物的活性可计算为细胞数量的变化百分比，计算方法如下：
   细胞活性(%) = 100 X (F_CMPD - F_O)/(F_CTRL - F_O)
   F_CMPD和F_CTRL分别是加入和未加入待测化合物时的平均荧光强度，F_O是空白对照品的平均荧光强度。
   对于剂量反应研究，可绘制检测数据与化合物浓度的曲线。也可采用PRISM或其他数据分析工具通过非线性回归
   分析确定EC₅₀(细胞增殖检测)和IC₅₀(细胞毒性检测)。
   
2. 吸光度算法(还原率%)
   校正系数Ro=Ao₅₇₀/Ao₆₀₀
   设置对照，空培养基加Alamar Blue液对照。
   还原率AR₅₇₀(%)=[A₅₇₀-(A₆₀₀×Ro)]×100
   A₅₇₀与A₆₀₀是指所有样本组的吸光度分别减去空培养基组的空对照Ao₅₇₀和Ao₆₀₀。