产品货号：
KFS318
中文名称：
XTT细菌增殖及毒性检测试剂盒
英文名称：
XTT Bacteria Proliferation and Cytotoxicity Detection Kit
产品规格：
500T|1000T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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XTT(二甲氧唑黄)是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，活细菌中存在与辅酶Ⅱ相关的脱氢酶，可将黄色的XTT还原成水溶性的橘黄色的甲臜。生成的甲臜能够溶解在培养基中，不形成颗粒，可直接用酶标仪检测定吸光值。
| 组分 | 500T | 1000T |
| XTT检测试剂 | 10mL | 20mL |
| 电子耦合剂 | 1mL | 2mL |
保存：-20℃，避光，避免反复冻融，有效期1年。
96孔板、1.5mL微量离心管、低速离心机、平板摇床、酶标仪(450nm波长)、微量移液器
- 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，例如一些抗氧化剂会干扰检测，需设法去除。
- 如果待测溶液有还原性，需提前测定不含细菌、但含有XTT检测溶液的空白吸光度(450nm处)。如果该吸光度很小，则可以直接加入XTT检测溶液；如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用培养基洗涤细菌两次，然后加入新的100μL培养基和50μL XTT溶液进行检测。
- 用酶标仪检测前请确保孔内没有气泡，否则会干扰测定。
- 为保证您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
一、针对细菌增殖/毒性检测
- 在96孔板加入细菌悬液100μL/孔(每孔细菌量约5×104个/mL)，置于细菌培养箱培养24h。
- 根据实验需要，加入适当浓度的受试化合物，并继续孵育适当时间，同时设立阴性对照组，并继续孵育适当时间。
- 使用前配制XTT工作液：每10mL XTT检测液加入1mL电子耦合剂，混合均匀。
- 每孔加20μL XTT工作液，在37℃培养箱中孵育1~4h。
- 酶标仪在450nm波长处检测每孔的光密度。
二、结果分析
您可以选择使用OD值或细菌数量来进行结果分析，我们提供以下方法供参考：
- 细菌存活率(％)=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]×100%
抑制率(％)=[(Ac-As)/(Ac-Ab)]×100%
注：各重复孔的OD值取均数±SD。
As=实验孔吸光度(含有细菌，培养基，XTT和受试化合物的孔的吸光度)
Ab=空白孔吸光度(不含细菌、含有培养基和XTT的孔的吸光度)
Ac=对照孔吸光度(含有细菌，培养基和XTT的孔的吸光度) - IC50：抑制率=50%时的药物浓度；IC90：抑制率=10%时的药物浓度。
三、制作标准曲线
可以基于该曲线确定待测样品的细菌数，使用此标准曲线的先决条件是培养检测条件一致。
- 计数板计数细菌悬液中的细菌数，接种细菌。
- 使用培养基等比稀释细菌悬液为一个浓度梯度，通常需要5～7个浓度梯度，每组3个复孔，然后接种细菌。(注意每孔的细菌数量。如果您将细菌悬液稀释在管中，在加入培养板的孔之前，请小心再次混匀细菌。每孔中细菌悬液的体积应该是一致的。)
- 每100μL培养基加入20μL XTT。继续孵育1~4h，用酶标仪测量450nm处的吸光度。制作出一条以细菌数为X轴坐标，OD值为Y轴坐标的标准曲线。
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