产品货号:
KFS198
中文名称:
Caspase 3检测试剂盒(分光光度法)
英文名称:
Caspase-3 Colorimetric Assay Kit
产品规格:
20T|50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒适用于培养细胞及新鲜组织caspase-3检测。
将caspase-3序列特异性的多肽偶联至发色基团。当该底物被Caspase-3剪切后,发色基团即游离出来,可通过酶标仪或分光光度计(λ=405nm或400nm)测定其吸光值,考察caspase-3的活化程度。
Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中caspase-3为关键的执行分子,与DNA断裂、染色质凝聚和凋亡小体形成有关。Caspase-3在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中,没有活性;但在细胞发生凋亡阶段,它被激活,活化的Caspase-3由两个大亚基和两个小亚基组成,裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。
保存:-20℃,避光,有效期1年。
低温高速离心机、酶标仪或分光光度计(100μL的比色皿)(λ=405nm或400nm)、微量移液器、玻璃匀浆器(组织样本);
1.5mL Microtube、PBS、蛋白定量试剂(可选购Bradford蛋白含量检测试剂盒,货号:KFS437)及仪器。
用凋亡诱导剂诱导JK细胞凋亡,在37℃,5% CO2培养箱培养6h后,按照说明书的操作步骤进行试验,结果如下图所示。
相关搜索:Caspase 3检测试剂盒(分光光度法),Caspase 3检测试剂盒,Caspase-3 Colorimetric Assay Kit
将caspase-3序列特异性的多肽偶联至发色基团。当该底物被Caspase-3剪切后,发色基团即游离出来,可通过酶标仪或分光光度计(λ=405nm或400nm)测定其吸光值,考察caspase-3的活化程度。
Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中caspase-3为关键的执行分子,与DNA断裂、染色质凝聚和凋亡小体形成有关。Caspase-3在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中,没有活性;但在细胞发生凋亡阶段,它被激活,活化的Caspase-3由两个大亚基和两个小亚基组成,裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。
组分 | 20T | 50T | 100T | 保存 |
Lysis Buffer | 5.0mL | 10.0mL | 20.0mL | 2~8℃ |
2×Reaction Buffer | 1.0mL | 2.5mL | 5.0mL | |
Caspase-3 Substrate | 100μL | 250μL | 500μL | -20℃,避光 |
100mM DTT | 60μL | 130μL | 250μL |
保存:-20℃,避光,有效期1年。
低温高速离心机、酶标仪或分光光度计(100μL的比色皿)(λ=405nm或400nm)、微量移液器、玻璃匀浆器(组织样本);
1.5mL Microtube、PBS、蛋白定量试剂(可选购Bradford蛋白含量检测试剂盒,货号:KFS437)及仪器。
- Caspase-3 Substrate避光保存及使用。
- 对某些凋亡诱导剂引起的细胞凋亡可能存在非依赖于Caspase-3活化的机制,这种情况时利用本试剂盒检测Caspase-3活性无明显改变,需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。
- 细胞数量需达到3~5×106个或新鲜组织50~100mg,以便能达到测定需要的100~200μg蛋白的要求,因为Caspase-3的活性与细胞裂解液的蛋白含量有关,如测定的OD值偏低,可通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。
- 样品裂解
- 细胞裂解方法
- 用适当的方法诱导细胞凋亡,同时设立阴性对照组,并收集细胞;
- 用PBS洗涤细胞二次(离心2000rpm,5min)收集3~5×106个细胞,尽量去除PBS上清;
- 在收集的沉淀细胞中加入150~200μL冰冷Lysis Buffer;
注意:使用前每50μL Lysis Buffer加入0.5μL DTT),吹打均匀。 - 置冰上裂解20~60min,其间涡旋振荡3~4次,每次10 s;或冻融2~3次;
- 4℃,离心(10000rpm) 1min;
- 小心吸取上清(含裂解的蛋白质)转移至新的管中,并放置冰上待用;
- 取少量上清(1~2μL),常规方法(Bradford法)测定其中的蛋白浓度。
- 用适当的方法诱导细胞凋亡,同时设立阴性对照组,并收集细胞;
- 组织裂解方法
- 每50~100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入150~200μL冰冷Lysis Buffer(注意:使用前每50μL Lysis Buffer加入0.5μL DTT),玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
- 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,10000转/分,4℃离心5min;
- 小心吸取上清(含裂解的蛋白质)转移至新的管中,并放置冰上待用;
- 取少量上清(1~2μL),常规方法(Bradford法)测定其中的蛋白浓度。
- 每50~100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入150~200μL冰冷Lysis Buffer(注意:使用前每50μL Lysis Buffer加入0.5μL DTT),玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
- 细胞裂解方法
- Caspase-3检测
- 吸取50μL含100~200μg蛋白的细胞或组织裂解上清;如体积不足50μL用10mM PBS,pH7.2~7.6补足至总体积50μL(各组均采用同样的蛋白量进行测定和比较);
- 加入50μL的2×Reaction Buffer;
注意:使用前每50μL 2×Reaction Buffer加入0.5μL DTT。 - 加入5μL Caspase-3 Substrate并于37℃避光孵育4小时;
- 用酶标仪或分光光度计(100μL的比色皿)在λ=405nm或400nm测定其吸光值。通过计算OD诱导剂/OD阴性对照的倍数来确定凋亡诱导剂组Caspase-3活化程度。
注意:以10mM PBS,pH7.2~7.6和Reaction Buffer作为空白对照。(50μL PBS + 50μL 2×Reaction Buffer)
- 吸取50μL含100~200μg蛋白的细胞或组织裂解上清;如体积不足50μL用10mM PBS,pH7.2~7.6补足至总体积50μL(各组均采用同样的蛋白量进行测定和比较);
用凋亡诱导剂诱导JK细胞凋亡,在37℃,5% CO2培养箱培养6h后,按照说明书的操作步骤进行试验,结果如下图所示。
相关搜索:Caspase 3检测试剂盒(分光光度法),Caspase 3检测试剂盒,Caspase-3 Colorimetric Assay Kit