产品货号:
KFS190
中文名称:
细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-APC/7-AAD双染)
英文名称:
Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit
产品规格:
10T|20T|50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素APC标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
7-AAD(7-amino-actinomycin D)是一种核酸染料,它不能通过正常质膜,随着细胞凋亡、细胞死亡过程,质膜对7-AAD的通透性逐渐增加,结合细胞凋亡中DNA的有控降解,在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光,通过7-AAD标记DNA的强弱,将细胞分为三群:7-AAD强为死亡细胞,7-AAD弱是凋亡细胞,7-AAD -为正常活力细胞。7-AAD同PI有着相似的荧光特性,但其发射波谱较PI窄,对其他检测通道的干扰更小,在多色荧光分析中是PI的最佳替代品,可与Annexin V-APC联合使用。
组分 | 10T | 20T | 50T | 100T |
AnnexinV-APC | 50μL | 100μL | 250μL | 500μL |
7-AAD染液 | 50μL | 100μL | 250μL | 500μL |
Binding Buffer | 5mL | 10mL | 25mL | 50mL |
保存:2~8℃,避光,有效期1年。
流式细胞仪、低速离心机、微量移液器(注:不建议使用荧光显微镜)
1.5m L Microtube、PBS、不含EDTA的胰酶消化液。
- Annexin V-APC组份建议按需分装冻存于-20℃,避光保存及使用,避免反复冻融。
- Binding Buffer组份不用时可放置于4℃保存,需要避光。
- 7-AAD为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
- 微量试剂取用前请离心集液。
- 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不应低于1×105,不推荐用于检测组织样本。
- 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含EDTA的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮刀会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
- 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
- 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
- 细胞收集
- 悬浮细胞:2000rpm,离心5min收集。
- 贴壁细胞:贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集。
注:胰酶消化时间不易过长,否则容易引起假阳性。
- 悬浮细胞:2000rpm,离心5min收集。
- 用PBS洗涤细胞二次(2000rpm,离心5min)收集1~5×105细胞;
- 加入500μL的Binding Buffer轻轻吹匀成单细胞悬液;
- 加入5μL Annexin V-APC和5μL 7-AAD染液,轻轻吹匀;
- 室温、避光、反应5~10min;
- 请在1hour内,进行流式细胞仪的观察和检测。
- 流式细胞仪分析
- 用流式细胞仪检测,APC激发波长Ex=633nm;发射波长Em=660nm,红色荧光,建议使用FL4通道检测;7-AAD激发波长Ex=546nm;发射波长Em=647nm,红色荧光,建议使用FL3通道检测。
- 荧光补偿调节:使用经凋亡诱导处理的正常细胞,作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。
- 用流式细胞仪检测,APC激发波长Ex=633nm;发射波长Em=660nm,红色荧光,建议使用FL4通道检测;7-AAD激发波长Ex=546nm;发射波长Em=647nm,红色荧光,建议使用FL3通道检测。
相关搜索:细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-APC/7-AAD双染),细胞凋亡检测试剂盒,Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit