产品货号:
GS0259
中文名称:
PCNA细胞增殖检测试剂盒(IHC方法检测)
英文名称:
PCNA Cell Proliferation Kit(IHC)
产品规格:
100次
发货周期:
1~3天
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PCNA即增殖细胞核抗原,是一种分子量为36KD的核蛋白,它为细胞DNA多聚酶“δ”的辅助蛋白,是真核细胞DNA合成时所必需的一种酸性核蛋白。PCNA在细胞核内合成,并储存在核内,细胞处于静止状态时,其含量很低,当细胞进入增殖周期中,其表达明显增加,故PCNA是反映细胞增殖状态的良好指标。
组分 | 规格 | 保存 |
组分A:Anti-PCNA Rabbit antibody | 100μL | -20℃ |
组分B:HRP-标记驴抗兔IgG | 100μL | |
组分C:Blocking Buffer | 15mL | 2~8℃避光 |
组分D:DAB Buffer | 5mL | |
组分E:DAB Substrate(20X) | 250μL | |
组分F:DAB Chromogenr(20X) | 250μL |
洗涤液:PBS缓冲液(PH7.4)
固定液:4%多聚甲醛溶解于PBS中,pH7.4,新鲜配制;
通透液:0.1%的Triton X-100溶解于0.1%柠檬酸钠溶液,新鲜配制。
在染色过程中,要保证样品不能变干。
- 对于贴壁细胞
- 固定:将处理好的细胞爬片用4%多聚甲醛室温固定30~60分钟。
- 洗涤:PBS洗2次,每次5分钟。
- 通透:0.1%~0.5%的Triton X-100室温透膜10~15分钟。
- 洗涤:PBST洗2次,每次5分钟。
- 封闭:加适量Blocking Buffer (组分C),湿盒中室温孵育30~60分钟。
- 洗涤:PBS洗2次,每次5分钟。
- 加一抗:按1:50用Blocking Buffer (组分C)稀释Anti-PCNA Rabbit antibody (组分A);每个爬片中加入稀释好的Anti-PCNA Rabbit antibody (组分A),4℃湿盒中孵育过夜。
- 洗涤:PBS洗2次,每次5分钟。
- 加酶标二抗:每个爬片加入适量HRP-标记驴抗兔IgG(组分B) (按1:50稀释),室温,孵育60分钟。
- 洗涤:PBS洗2次,每次5分钟。
- DAB混合液的配制:DAB混合液的配制:将50μL DAB Substrate(20X)(组分E)以及50μL DAB Chromogen(20X)(组分F)稀释到900μL DAB Buffer(组分D)中,混匀。
- 滴加50μL DAB混合液到每个爬片上,避光,室温孵育5~10分钟(视阳性组织显色情况判断);
- 终止显色:用蒸馏水终止显色反应。
- 复染:每个组织滴加适量苏木素染液,染色1~5分钟。
- 苏木素复染的时间依赖于所用的苏木素。
- 洗涤:ddH2O洗2次,每次5分钟。
- 75%乙醇中室温浸泡5分钟。
- 85%乙醇中室温浸泡5分钟。
- 95%乙醇中室温浸泡5分钟。
- 二甲苯室温浸泡15分钟。
- 中性树胶封片:加中性树胶盖玻片封片。
- 固定:将处理好的细胞爬片用4%多聚甲醛室温固定30~60分钟。
- 对于石蜡包埋的组织切片
- 按照标准操作过程进行固定,脱蜡和水化;
- 选择合适的抗原修复方法进行抗原修复;
- 洗涤:洗涤:PBS洗2次,每次5分钟。
- 灭活酶处理:3%H2O2-甲醇溶液,避光,室温处理15分钟。
- 如果使用HRP偶联的抗体检测,这一步骤可以在这里也可以在加入一抗之后。
- 洗涤:蒸馏水洗3次,每次2分钟。
- 封闭:加适量Blocking Buffer (组分C),湿盒中室温孵育30~60分钟。
- 洗涤:PBS洗2次,每次5分钟。
- 弃封闭液,弃封闭液,每个爬片中加入稀释好的Anti-PCNA Rabbit antibody(1:50) (组分A),4℃湿盒中孵育过夜。
- 洗涤:PBS洗3次,每次5分钟。
- 加酶标二抗:每个爬片加入适量HRP-标记驴抗兔IgG (组分B)(1:250~1:500),室温,孵育60分钟。
- 洗涤:PBS洗3次,每次5分钟。
- DAB混合液的配制:将50μL DAB Substrate(20X) (组分E)以及50μL DAB Chromogen(20X) (组分F)稀释到900μL DAB Buffer (组分D)中,混匀。
- 滴加50μL DAB混合液到每个爬片上,避光,室温孵育5~10分钟(视阳性组织显色情况判断);
- 终止显色:用蒸馏水终止显色反应。
- 复染:每个组织滴加适量苏木素染液,染色1~5分钟。
- 苏木素复染的时间依赖于所用的苏木素。
- 洗涤:ddH2O洗3次,每次5分钟。
- 75%乙醇中室温浸泡5分钟。
- 85%乙醇中室温浸泡5分钟。
- 95%乙醇中室温浸泡5分钟。
- 二甲苯室温浸泡15分钟。
- 中性树胶封片:加中性树胶盖玻片封片。
- 按照标准操作过程进行固定,脱蜡和水化;
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