Ki67细胞增殖检测试剂盒(IHC方法检测)

产品货号：

GS0257

中文名称：

Ki67细胞增殖检测试剂盒(IHC方法检测)

英文名称：

KI67 Cell Proliferation Kit(IHC)

产品规格：

100次

发货周期：

1～3天

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Ki67是一种标记细胞增殖状态的核抗原，主要表达于G1期，S期，G2期，及有丝分裂间期的细胞，但在G0期的细胞中不表达。其功能与细胞增殖密切相关，因此Ki67常用于检测肿瘤细胞的生长指数。

组分	规格
组分A：Anti-ki67 Rabbit antibody	100μL
组分B：HRP标记驴抗兔IgG	100μL
组分C：Blocking Buffer	15mL
组分D：DAB Buffer	5mL
组分E：DAB Substrate(20X)	250μL
组分F：DAB Chromogen(20X)	250μL

保存：-20℃，其中组分C置于2～8℃避光保存。

自备试剂

洗涤缓冲液：磷酸盐缓冲盐水（PBS，pH7.4）
固定液：4%多聚甲醛溶解于PBS中，pH7.4，新鲜配制；
通透液：0.1%～0.5%的Triton X-100溶解于0.1%柠檬酸钠溶液，新鲜配制。

使用方法

在染色过程中，要保证样品不能变干。

对于贴壁细胞
- 固定：将处理好的细胞爬片用4%多聚甲醛室温固定30～60分钟。
- 洗涤：PBST洗2次，每次5分钟。
- 通透：0.1%～0.5%的Triton X-100室温透膜10～15分钟。
- 洗涤：PBST洗2次，每次5分钟。.
- 封闭：加适量Blocking Buffer (组分C)，湿盒中室温孵育30～60分钟。
- 洗涤：PBS洗2次，每次5分钟。
- 加一抗：按1:50～1:200用Blocking Buffer (组分C)稀释Anti-ki67 Rabbit antibody(组分A)；每个爬片中加入稀释好的Anti-ki67 Rabbit antibody，4℃湿盒中孵育过夜。
- 洗涤：PBS洗2次，每次5分钟。
- 加酶标二抗：每个爬片加入适量HRP标记驴抗兔IgG1:250～1:500）(组分B)，室温，孵育60分钟。
- 洗涤：PBST洗2次，每次5分钟。
- DAB混合液的配制：将50μL DAB Substrate(20X)(组分E)以及50μL DAB Chromogen(20X) (组分F)稀释到900μL DAB Buffer (组分D)中，混匀。
- 滴加50μL DAB混合液到每个爬片上，避光，室温孵育5～10分钟（视阳性组织显色情况判断）；
- 终止显色：用蒸馏水终止显色反应。
- 复染：每个组织滴加适量苏木素染液，染色1～5分钟。
  - 苏木素复染的时间依赖于所用的苏木素。
- 洗涤：ddH2O洗2次，每次5分钟。
- 75%、85%、95%乙醇中室温依次各浸泡5分钟；
- 二甲苯室温浸泡15分钟，
- 中性树胶封片：加中性树胶盖玻片封片。
对于石蜡包埋的组织切片
- 按照标准操作过程进行固定，脱蜡和水化；
- 选择合适的抗原修复方法进行抗原修复；
- 洗涤：用PBS室温清洗玻片5分钟。
- 灭活酶处理：3% H2O2-甲醇溶液，避光，室温处理15分钟。
  - 如果使用HRP偶联的抗体检测，这一步骤可以在这里也可以在加入一抗之后。
- 洗涤：蒸馏水洗涤3次，每次2分钟；
- 封闭：加适量Blocking Buffer (组分C)，湿盒中室温孵育30～60分钟7.洗涤：PBS洗涤2次，每次5分钟。
- 弃封闭液，每个爬片中加入Anti-ki67 Rabbit antibody(稀释比例：1:50)(组分A)，4℃湿盒中孵育过夜。
- 洗涤：PBS洗3次，每次5分钟。
- 加酶标二抗：每个爬片加入适量HRP标记驴抗兔IgG(1:250～1:500)(组分B)，室温，孵育60分钟。
- 洗涤：PBS洗2次，每次5分钟。
- DAB混合液的配制：将50μL DAB Substrate(20X)(组分E)以及50μL DAB Chromogen(20X)(组分F)稀释到900μL DAB Buffer(组分D)中，混匀。
- 滴加50μL DAB混合液到每个爬片上，避光，室温孵育5～10分钟（视阳性组织显色情况判断）；
- 终止显色：用蒸馏水终止显色反应。
- 复染：每个组织滴加适量苏木素染液，染色1～5分钟。
  - 苏木素复染的时间依赖于所用的苏木素。
- 洗涤：ddH2O洗2次，每次5分钟。
- 75%、85%、95%乙醇中室温依次各浸泡5分钟；
- 二甲苯室温浸泡15分钟，
- 中性树胶封片：加中性树胶盖玻片封片。

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