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本试剂盒是设计用来检测细胞周期进程和增殖的，在活细胞、经通透性处理的细胞和固定化细胞中使用我们独特的Nuclear GreenTM LCS1对细胞周期进程和增殖进行监测。在所给样品的不同细胞中，有G0/G1,S和G2/M期以及细胞凋亡之前的亚-G1期等，可以通过流式细胞仪检测。经过Nuclear Green LC1染色的细胞可以通过流式细胞仪在Ex/Em = 490nm/520nm(FL1通道)进行检测。

细胞周期一共分为四个阶段：G1期，S期，G2期，M期。细胞传代经历了整个细胞周期：DNA复制是在S期完成，细胞二分裂是在M期完成，G0/G1期和G2期是为DNA复制和细胞分裂提供足够的时间，蛋白，细胞器等。

组分	规格
组分A：200×Nuclear Green LCS1	250μL
组分B：Assay Buffer	50mL

保存：-20℃，干燥避光。


使用前，请将该试剂盒的所有组份在室温解冻。

• 样品的准备：用预热的培养基或缓冲液调整细胞浓度为5～10×10⁵cells/mL，0.5mL/管；
  
  • 每个细胞系均需要依据自身特性确定其最佳细胞密度。具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定。
• 药物处理：根据药物待检药物诱导细胞凋亡、增殖的快慢，实验目的等影响因素而决定药物处理的时间；
  
• 加入2.5μL 200×Nuclear Green LCS1 (组分A)，37℃,5% CO₂培养箱孵育30～60min；
  
  • 对于贴壁细胞，为保证细胞的完成性，可以用含有0.5mM EDTA的胰酶消化，并用含有血清的培养基洗涤细胞，然后再与Nuclear Green LCS1染色孵育；染色孵育的时间与细胞的类型，细胞浓度，实验目的等因素有关；在DNA染色之前，不需要固定细胞，因为Nuclear GreenTMLCS1可以渗透到细胞内。
• 选做：1000rpm，4min，离心；然后用0.5mL Assay buffer (组分B)或者自己选择的缓冲液重悬细胞。
  
• 使用流式细胞仪检测荧光强度，Ex/Em = 490/525nm（FL1 channel1）。

图1．喜树碱处理Jurkat细胞后DNA变化的检测。用喜树碱（终浓度为20μM）处理Jurkat细胞（蓝色），未处理的Jurkat细胞作为空白对照（红色）；37℃，5% CO₂培养箱孵育8小时；Nuclear Green LCS1染色60分钟。使用FACSCalibur (Becton Dickinson,San Jose,CA)流式细胞仪（FL1 channel）检测Nuclear Green LCS1的荧光强度。未处理的Jurkat细胞，用Nuclear Green LCS1进行染色显示G1，S，和G2期(红色)中DNA的变化情况。用喜树碱处理的Jurkat细胞（Jurkat细胞发生凋亡），用Nuclear Green LCS1进行染色显示，S期和G2期的荧光强度降低。
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