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细胞凋亡在许多生理过程中是至关重要的。目前已经描述了几种鉴定凋亡细胞的方法。核内解离被认为是凋亡的关键生化事件，导致双链，低分子量DNA片段以及高分子量DNA中的单链断裂。可以通过在酶反应中用修饰的核苷酸标记游离的3'-OH末端来鉴定那些DNA链断裂。末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）可以催化DIG-dUTP释放3'-OH DNA末端。DIG-dUTP首先与生物素缀合的抗地高辛抗体反应，后者与链霉亲和素-AP（SABC-AP）相关联。结合BCIP/NBT显色剂，在显微镜下分析凋亡细胞染色紫蓝色。

• 在染色过程中，避免组织干燥。
  
• 使用前，请将试剂盒所有组份离心。

• 样品制备:
  
  • 对于细胞涂片：在室温下用4％多聚甲醛固定30～60分钟，并用PBS冲洗两次，每次2～5分钟。
    
  • 对于冷冻切片：在室温下用4％多聚甲醛固定30～60分钟，并用PBS冲洗两次，每次2～5分钟。
    
  • 对于石蜡切片：根据标准方案进行脱水和脱水组织切片，并用PBS冲洗两次，每次2分钟。
• 加入50μL新鲜制备的3% H2O2，并在室温下孵育10分钟。
  
• 用双蒸水洗涤三次，每次2分钟。
  
• 用0.01M TBS(pH7.5)将Protein K 200X(组分G)稀释成1X工作液。(0.01M TBS pH7.5的制备：加入8.5g NaCl，1.2g Tris和0.45～0.5mL乙酸至1L双蒸水中，溶解，混匀，调pH。)
  
• 加入20～100μL Protein K工作液至样品中(仅限石蜡切片，细胞和冷冻切片一般不需要蛋白K消化），并在37℃下消化5～15分钟。然后用0.01M TBS冲洗3次，每次2分钟。
  
  • 最佳的消化时间应根据细胞类型，实验目的等因素决定。细胞涂片和冰冻切片一般不需要消化或仅消化10～60秒，新鲜石蜡切片消化5～10min，旧石蜡切片消化10～15min。
• 反应混合物的制备：加入1μL TdT (组分B) and 1μL DIG-dUTP (组分C)至18μL Labeling Buffer (组分A)中，混匀。
  
• 将上述反应混合物加入到样品上，20μL/样，置于湿盒中，37℃，孵育2小时。
  
• 用0.01M的TBS洗涤三次，每次2分钟。
  
• 加入50 Blocking Reagent (组分D)，室温孵育30分钟，丢弃阻断试剂，在此步骤无需洗涤样品。
  
• 用抗体稀释液(组分I)按照1:100的比例稀释生物素标记digoxin抗体(组分E)，混匀，加入50μL至样品中。
  
• 置于湿盒中，37℃，孵育30～60min，
  
• 用0.01M TBS洗涤3次，每次两分钟。
  
• 用抗体稀释液(组分I)按照1:100的比例稀释SABC-AP(组分F)，混匀，加入50μL至样品中。
  
• 置于湿盒中，37℃，孵育1小时
  
• 用0.01M TBS洗涤3次，每次五分钟。
  
• 用0.01M TBS (pH9.0～9.5)将BCIP/NBT显色液(20X) (组分H)稀释成1X，混匀。
  
• 加入50μL混合物到样品中，避光，室温孵育20～30分钟。
  
• 用蒸馏水洗涤三次，每次5分钟。
  
• 封片后，在光学显微镜下分析，如有需要样品可以用核固红等进行复染。