产品货号:
GS0214
中文名称:
MTT细胞增殖检测试剂盒
英文名称:
MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit
产品规格:
250T|500T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒被广泛应用于由诱导剂和抑制剂引起的细胞增殖活性变化的体外检测,可以用于一些生物活性因子的活性检测、药物筛选、细胞毒性测定等。
活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。在特定溶剂存在的情况下,甲臜可以被完全溶解。
细胞增殖检测分析是测定细胞周期调控因子,如:生长因子,细胞因子,促细胞分裂素及药物效果的直接方法之一。在细胞增殖过程中乳酸脱氢酶的活性会增加,而四唑盐(如:MTT,XTT,WST-1或WST-8)在代谢活跃的细胞环境中会逐渐减少,形成能够改变培养基颜色的甲臜(Formazan)染料。
组分 | 250T | 500T | 保存 |
组分A:MTT Reagent | 12.5mg | 25mg | 2~8℃避光 |
组分B:MTT Solvent | 2×1.25mL | 5mL | |
组分C:Formazan Solubilization Solution | 27.5mL | 2×27.5mL | 室温 |
使用前该试剂盒需要在室温解冻。
- 所有的管子在打开之前需要先离心。
- 使用96孔板进行检测时,通常细胞增殖检测实验每孔加入100μL 2000个细胞,细胞毒性检测实验每孔加入100μL 5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。按照实验需要,进行培养并给予0~10μL特定的药物刺激。在培养箱中孵育24小时。
- 每个样品建议设置5个复孔。
- MTT溶液的配制:用MTT Solvent(组分B)溶解MTT Reagent (组分A),配制成5mg/mL的MTT溶液。配制后即可使用,或直接-20℃避光保存,也可以根据需要适当分装后-20℃避光保存。
- 每孔加入10μL MTT溶液,使每个孔中的MTT得终浓度为0.5mg/mL。
- 轻轻混匀后,5%CO2,37℃培养箱中孵育4小时。
- 孵育后,蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)沉积在细胞中。
- 小心吸取每个孔中的培养基已防止细胞单层破裂。
- 每孔加入100μL Formazan Solubilization Solution(组分C)
- 将96孔板放在振荡器上轻轻震荡10分钟,直至在普通光学显微镜下观察发现甲臜全部溶解。
- 在酶标免疫检测仪570nm测定吸光度。
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