产品货号:
QN0001
中文名称:
金担子素A
英文名称:
Aureobasidin A
产品规格:
1mg
发货周期:
1~3天
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金担子素A (Aureobasidin A,AbA)是从丝状真菌Aureobasidium pullulans No.R106中分离出来的环酯肽类抗生素,具有很强的抗真菌能力。在较低的浓度下(0.1~0.5μg/mL)即可对酵母产生毒性。对其敏感的真菌种类包括:出牙酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A.niger.)。作用机制在于AbA抑制了真菌生长所依赖的肌醇磷酰胺(IPC)合成酶的活性,干扰鞘脂合成,从而进一步杀死菌株。编码IPC合成酶的基因研究较多的有来自酿酒酵母菌的AUR1基因,以及构巢曲霉的AURA基因,两者具有同源性。通过对这些编码基因进行突变即可使得菌株对AbA产生抗性,如AUR1-C基因。
AbA非常适合用作阳性克隆子筛选用的药物选择性标记。AbA抗性也是酵母单/双杂交研究中理想的报告子。具体的工作浓度取决于宿主细胞的敏感度。
分子式:C60H92N8O11
分子量:1100
纯度:≥95%
熔点:155~157℃
外观:白色冻干粉
溶解性:0.5mg/mL无水乙醇
组分 | 规格 |
金担子素A | 1mg |
说明书 | 1份 |
保存:2~8℃,有效期2年。
AbA非常适合用作阳性克隆子筛选用的药物选择性标记。AbA抗性也是酵母单/双杂交研究中理想的报告子。本品为溶于甲醇的AbA溶液,浓度为1mg/mL。具体的工作浓度取决于宿主细胞的敏感度。
抗AbA的酵母转化系统
- 加入0.5mL过夜培养的酵母到50mL YPD培养基中(配方:1L液体培养基含有10g yeast extract,20g polypeptone,20g D-glucose;固体培养基另外加入2%琼脂)。
- 30℃培养约6小时,测定OD660为1~2。使用二倍体时,测定OD660为2~4。
- 1000×g离心5分钟。
- 用10mL Solution A (配方:100mM Lithium acetate,10mM Tris-HCl pH7.5,1mM EDTA)悬浮沉淀,1000×g离心5分钟。
- 用Solution A重悬沉淀,直到OD660为150。
- 在管内分取100μL细胞悬浮液,30℃培养1小时。
- 加入5μg载体(环状或线性DNA)和150μg Carrier DNA (已经过100℃加热10分钟,并迅速冷却)。
注:pAUR101需使用线性DNA进行转化。使用环状DNA会降低转化效率甚至转化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的质粒DNA进行转化。 - 加入850μL Solution B (配方:取40g Polyethylene Glycol 4000溶于100mL Solution A充分溶解,需要现用现配),轻轻混匀。
- 30℃培养30分钟后,42℃培养15分钟。
- 室温放置10分钟。
- 5000rpm离心1分钟,用5mL YPD培养基悬浮沉淀。
- 30℃培养6小时~过夜。
- 5000~10000rpm离心,用1~10mL 0.9% NaCl悬浮沉淀。
- 在YPD选择培养基平板(含有一定浓度的AbA,依菌株类型而定)上接种100μL细胞悬液。30℃培养3~4天后转化完成。
- 挑取阳性转化子,和/或测定转化效率(以每微克质粒DNA转化的菌落数来表示)。
1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2.AbA的最佳工作浓度因宿主细胞不同而有差异,可根据最低抑菌浓度(MIC)来确定。
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