高尔基体提取试剂盒

产品货号：

HR0247

中文名称：

高尔基体提取试剂盒

英文名称：

Golgi body extraction kit

产品规格：

50T|100T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的高尔基体提取。提取得到的高尔基体具有完整生物活性，可以用于高尔基体功能研究、蛋白提取等各种下游应用。本试剂盒可以用于冻存样本的提取。

本产品提取得到的高尔基体具有完整生物活性，可用于高尔基体功能研究、蛋白提取等各种下游应用。

背景资料：

高尔基体是由许多扁平的囊泡构成的以分泌为主要功能的细胞器。又称高尔基器或高尔基复合体；高尔基体是由数个扁平囊泡堆在一起形成的高度有极性的细胞器。常分布于内质网与细胞膜之间，呈弓形或半球形，凸出的一面对着内质网称为形成面或顺面。凹进的一面对着质膜称为成熟面或反面。顺面和反面都有一些或大或小的运输小泡，在具有极性的细胞中，高尔基体常大量分布于分泌端的细胞质中。因其看上极像滑面内质网，因此有科学家认为它是由滑面内质网进化而来的。

高尔基体中的酶主要有糖基转移酶、磺基-糖基转移酶、氧化还原酶、磷酸酶、蛋白激酶、甘露糖苷酶、转移酶和磷脂酶等不同的类型。高尔基体的主要功能将内质网合成的蛋白质进行加工、对比分类、与包装，然后分门别类地送到细胞特定的部位或分泌到细胞外。

产品组成：

组分	50T	100T
试剂A：高尔基体提取液A	25mL	50mL
试剂B：高尔基体提取液B	25mL	50mL
试剂C：试剂WT	1mL	1mL
试剂D：高尔基体保存液	20mL	40mL

保存：2～8℃，有效期1年。

自备器材：
移液器、离心机、涡旋混匀器、振荡器、Dounce匀浆器、PBS缓冲液

注意事项：

旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有标准Dounce匀浆器，用普通1mL玻璃匀浆器匀浆也可，但是高尔基体回收率会下降。

使用方法：

细胞高尔基体提取：
- 取1～2×10⁷个细胞，在4℃，500×g条件下离心2～3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
  注：
  ● 贴壁培养细胞用胰酶消化下来或者用刮刀刮取均可。
- 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
  注：
  ● 用1000×g力离心5分钟。
- 加入500μL冷的试剂A重悬细胞，置冰上10分钟。
- 用Dounce匀浆器充分匀浆几分钟。
  【注】
  ● 先用Dounce匀浆器的松型槌初步匀浆20～30次，再用紧型槌匀浆20～30次。
  ● 每上下一个来回为一次。
- 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。
- 将上清吸入另一预冷的干净离心管，弃沉淀。
- 将上清在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。
- 将上清吸入另一预冷的干净离心管，弃沉淀。
- 将上清在4℃，5000×g力条件下离心10分钟。
- 将上清吸入另一预冷的干净离心管，弃沉淀。
- 在上清中加入10μL试剂WT。
- 在4℃，20000×g力条件下离心20分钟。弃上清，留沉淀。
- 在沉淀中加入500μL冷的试剂B，轻轻混匀。
- 在4℃，20000×g力条件下离心30分钟。
- 弃上清，沉淀用高尔基体保存液重悬。
  注：
  ● 也可不用试剂盒中的高尔基体保存液重悬。
  ● 根据实验需要选择合适的缓冲液重悬高尔基体或直接用于下游实验。
- 即得到高尔基体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
组织高尔基体提取：
- 取50～100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
- 用手术剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
  注：
  ● 用1000×g力离心5分钟。
- 加入500μL冷的试剂A重悬细胞，置冰上10分钟。
- 用Dounce匀浆器充分匀浆几分钟。
  注：
  ● 先用Dounce匀浆器的松型槌初步匀浆20～30次，再用紧型槌匀浆20～30次。
  ● 每上下一个来回为一次。
- 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。
- 将上清吸入另一预冷的干净离心管，弃沉淀。
- 将上清在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。
- 将上清吸入另一预冷的干净离心管，弃沉淀。
- 将上清在4℃，5000×g力条件下离心10分钟。
- 将上清吸入另一预冷的干净离心管，弃沉淀。
- 在上清中加入10μL试剂WT。
- 在4℃，20000×g力条件下离心20分钟。弃上清，留沉淀。
- 在沉淀中加入500μL冷的试剂B，轻轻混匀。
- 在4℃，20000×g力条件下离心30分钟。
- 弃上清，沉淀用高尔基体保存液重悬。
  注：
  ● 也可不用试剂盒中的高尔基体保存液重悬。
  ● 根据实验需要选择合适的缓冲液重悬高尔基体或直接用于下游实验。
- 即得到高尔基体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

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