产品货号：
KFS324
中文名称：
FITC-Brdu细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)
英文名称：
BrdU cell proliferation Detection Kit
产品规格：
20T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒细胞增殖检测是一个基于荧光检测的实验，可以监测细胞健康和通过胸苷掺合来估量DNA合成从而监测细胞分裂。
背景资料：
BrdU(5-溴代-2'-脱氧尿苷，溴脱氧尿苷)是一种合成的核苷酸即胸苷的类似物。BrdU通常被用于检测活组织中再生的细胞。BrdU可以掺合到复制细胞中新的合成DNA中(在细胞周期S期)，在DNA复制可代替胸苷。利用抗BrdU的特异性抗体便可以用于检测这个插入的化学品，从而检测出细胞是否在复制其DNA。
产品组成：
自备器材：
注意事项：
操作方法：
相关搜索：FITC-Brdu细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)，细胞增殖检测试剂盒，BrdU cell proliferation Detection Kit
背景资料：
BrdU(5-溴代-2'-脱氧尿苷，溴脱氧尿苷)是一种合成的核苷酸即胸苷的类似物。BrdU通常被用于检测活组织中再生的细胞。BrdU可以掺合到复制细胞中新的合成DNA中(在细胞周期S期)，在DNA复制可代替胸苷。利用抗BrdU的特异性抗体便可以用于检测这个插入的化学品，从而检测出细胞是否在复制其DNA。
产品组成：
| 组分 | 规格 | 保存 |
| FITC荧光标记BrdU流式抗体 | 100μL | 2～8℃，避光 |
| 染色缓冲液 | 6mL | 2～8℃ |
| 洗涤液 | 100mL | |
| 变性反应缓冲液 | 6mL | |
| 通透液 | 10mL | |
| 变性剂 | 1.2mL | -20℃ |
自备器材：
- 仪器：微量移液器、低速离心机、平板摇床、微量移液器、流式细胞仪、1.5mL Microtube
- 试剂：
- BrdU (5-溴代-脱氧尿苷，KFS599)
- 2%多聚甲醛固定液
- 0.125%胰酶消化液
- 10mM PBS,pH7.5
- BrdU (5-溴代-脱氧尿苷，KFS599)
注意事项：
- BrdU是光敏型，所以必须在黑暗中加入。细胞加了BrdU以后也可能光敏感，因此也在黑暗中培养。加入BrdU的时间和浓度根据细胞的类型和复制时间来确定，范围在15分钟到2个小时，浓度从10μM到100μM。例如，处理鼠胚胎成纤维细胞为30μM处理60min。
操作方法：
- 细胞处理步骤：
- 在最适的环境下培养细胞(细胞密度在临界对数生长期)加入BrdU至终浓度为30μM.孵育30～60分钟。
- 吸去培养基，PBS洗一次。
- 0.125%胰蛋白酶消化5～15分钟。
- 收集细胞方法见BrdU标记步骤中所示。
- 在最适的环境下培养细胞(细胞密度在临界对数生长期)加入BrdU至终浓度为30μM.孵育30～60分钟。
- BrdU标记步骤：
- 收集细胞：1000g，10min收集细胞，以每管500μL洗涤液重悬离心洗涤2次，调整细胞数在105～106/管。
- 固定：每管加入500μL固定液重悬细胞，4度固定过夜，以每管500μL洗涤液离心洗涤2次，500～800g，10min。
- 通透：每管加入500μL通透液重悬细胞，冰上孵育2分钟，以每管500μL洗涤液离心洗涤2次，500～800g，10min。
- DNA变性：以300μL DNA变性工作液(计算每次反应所需要的变性工作液总量后，以每300μL变性缓冲液加入50μL变性剂混匀后，4℃放置待用)重悬细胞，37℃反应30min，以每管500μL洗涤液离心洗涤2次，500～800g，10min。
- BrdU标记：以195μL染色缓冲液重悬细胞，加入FITC-BrdU抗体5μL(0.125μg)/每管，4度避光孵育30min。
上流式仪检测，488nm激发波长，520nm发射波长。
- 收集细胞：1000g，10min收集细胞，以每管500μL洗涤液重悬离心洗涤2次，调整细胞数在105～106/管。
相关搜索：FITC-Brdu细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)，细胞增殖检测试剂盒，BrdU cell proliferation Detection Kit