产品货号：
GL0332
中文名称：
细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)
英文名称：
产品规格：
100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒适用于培养细胞的荧光自噬染色观察，又可用FACS检测细胞自噬发生的比例，可与EB合用双染。
背景资料：
产品组成：
保存：按标签指示条件保存，有效期1年。
自备材料：
注意事项：
操作步骤：
一、玻片法
二、96孔板法
三、MDC与EB双染法
染色结果：
荧光染色结果：药物干预组细胞呈现了更高的荧光强度和更多的亮绿色MDC标记颗粒；
FACS检测结果：药物干预组MDC阳性细胞百分比高于对照组。
相关搜索：细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)，MDC染色液
背景资料：
自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞噬物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物、损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。自噬是一种进化上保守的降解过程，通过溶酶体途径将长寿命蛋白、细胞器及其他细胞质等组分进行降解，自噬通路的激活对多种细胞功能都是必需的，包括饥饿状态下的存活、细胞内组分清除、发育及免疫等过程。
丹酰尸胺(Dansylcadaverine，MDC)，是一种嗜酸性的荧光色素，通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长355~380nmnm，阻断滤光片波长512～530nm。
产品组成：
| 组分 | 规格 | 保存条件 |
| 试剂(A):MDC Stain(10×) | 1mL | -20℃，避光 |
| 试剂(B):Stain Buffer | 50mL | 4℃ |
| 试剂(C):Wash Buffer | 100mL | 4℃ |
保存：按标签指示条件保存，有效期1年。
自备材料：
- 低速离心机、1.5mL离心管
- 培养液、蒸馏水、磷酸盐缓冲液
- 载玻片、盖玻片、96孔板
- 荧光显微镜、流式细胞仪
注意事项：
- MDC Stain和EB对人体有一定害处，请小心操作。
- 收集细胞前可在培养液中加入不同浓度的药物培养一定时间，诱导细胞自噬。
- 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
- Wash Buffer可用PBS代替。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤：
一、玻片法
- 收集细胞，用300～500μL的Wash Buffer清洗细胞1次，800～1000rpm离心5min，弃上清，加入适量的Stain Buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml。
- 取90μL细胞悬液至新的1.5mL离心管中，加入10μL的MDC Stain(10×)，轻轻混匀。
- 37℃或室温避光染色15～60min。
- 800～1000rpm离心5min，弃上清，收集细胞，用300～500μL的Wash Buffer清洗细胞2次，800～1000rpm离心5min，弃上清。
- 加入100μL的Wash Buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。
- 荧光显微镜观察计数并拍照，也可用流式细胞仪检测药物干预组MDC阳性细胞百分比。
二、96孔板法
- 轻轻吸除96孔板中的培养液，各孔加入10μL MDC Stain(10×)和90μL的Stain Buffer，37℃ 5%CO2条件下避光孵育15～60min。
- 各孔加入100μL Wash Buffer清洗2～3次，荧光显微镜或流式细胞仪检测观察。
三、MDC与EB双染法
- 收集细胞，用300～500μL的Wash Buffer清洗细胞1次，800～1000rpm离心5min，弃上清，加入适量的Stain Buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml。
- 取90μL细胞悬液至新的1.5mL离心管中，加入10μL MDC Stain(10×)和0.2μM EB染液，轻轻混匀，滴加于载玻片上，室温避光染色15～60min，加盖玻片。
- 荧光显微镜或流式细胞仪检测观察。
染色结果：
荧光染色结果：药物干预组细胞呈现了更高的荧光强度和更多的亮绿色MDC标记颗粒；
FACS检测结果：药物干预组MDC阳性细胞百分比高于对照组。
相关搜索：细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)，MDC染色液