固定包埋组织DNA提取试剂盒

产品货号：

ALH175

中文名称：

固定包埋组织DNA提取试剂盒

英文名称：

DNA extraction kit for extracting embedded tissue

产品规格：

50次|100次

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒适用于快速提取各种福尔马林固定和石蜡包埋组织DNA。通过独特裂解液热处理和蛋白酶K共同作用迅速裂解细胞释放出基因组DNA，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：

离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
多次柱漂洗确保高纯度，OD₂₆₀/OD₂₈₀典型的比值达1.7～1.9，长度可达30～50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

产品组成：

组分	50次	100次
平衡液	5mL	10mL
裂解液FTL	11mL	20mL
结合液CB	11mL	20mL
抑制物去除液IR	25mL	50mL
漂洗液WB	13mL	25mL
洗脱缓冲液EB	15mL	15mL
蛋白酶K溶液(20mg/mL)	1.5mL	3mL
吸附柱AC及收集管(2mL)	50套	100套

保存：室温，有效期1年。

保存事项：

结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
蛋白酶K保存在即用型甘油缓冲液中，常温运输。收到后，不超过25℃室温至少保存6个月，4℃保存12个月，-20℃保存2年。
避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

注意事项：

所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C或者类似离心机。
需要自备乙醇（需要准备100%/80%/60%/40%不同浓度）或者二甲苯。
实验前将需要的水浴先预热到37℃备用。
结合液CB和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

使用方法：
第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

将组织切片放入离心管子，浸泡在二甲苯中脱蜡约30分钟（具体时间根据切片厚度调整）。
将切片依次放入100%乙醇/80%乙醇/60%乙醇/40%乙醇/去离子水，每个液体中浸泡10秒钟重新水化切片。
- 刚放入100%乙醇时，应该见到切片变白。
显微镜观察下，用刀片切下拟提取DNA的目标组织，放入预先称重的1.5mL离心管。再次称重，计算出切片组织重量。
在25～50mg组织中加入200μL裂解液FTL，再加入20μL的蛋白酶K溶液(20mg/mL)，立即混匀，混匀后置37℃水浴过夜。
再加入10μL的蛋白酶K溶液(20mg/mL)，混匀后55℃水浴1～2小时。
- 此步骤后，不应该见到粗大的组织颗粒了。
加入200μL结合液CB，立刻涡旋振荡20秒充分混匀后置70℃水浴10分钟。
平衡液预处理吸附柱备用：
使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体方法参见前文“关于平衡液的使用”
冷却后加入100μL异丙醇，立刻涡旋振荡30秒充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
用1毫升的枪头吸取混合物，将混合物加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13000rpm离心60秒，倒掉收集管中的废液。
- 如果有不溶组织物可能堵住枪头，可将枪头在吸水纸上轻蹭去除不溶物；如果吸上来的混合物少则可以将枪头和不溶物一起弃去，该做法是为了去除不溶物，以免堵塞离心柱。
加入500μL抑制物去除液IR，12000rpm离心30秒，弃废液。
加入600μL漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000rpm离心30秒，弃掉废液。
加入600μL漂洗液WB，12000rpm离心30秒，弃掉废液。
将吸附柱AC放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μL洗脱缓冲液EB （洗脱缓冲液事先在65～70℃水浴中预热效果更好），室温放置3～5分钟，12000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12000rpm离心1分钟。
- 洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于50μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。
DNA可以存放在2～8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。

附录参考：
关于平衡液的使用

介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37℃使沉淀完全消失。
使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μL的平衡液至柱子中。13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。

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